Manipulación de genes: Northern Blot

Question 1

¿Qué es Northern Blot?

Answer 1

Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia de RNA específica en una muestra de sangre o tejido

Question 2

¿Qué se usa en esta técnica para encontrar el RNA?

Answer 2

DNA

Question 3

Pasos para realizar una Northern Blot

Answer 3

1. Extracción del RNA y separación por electroforesis
2. Transferencia Northern a una membrana
3. Hibridación del RNA con una sonda específica
4. Detección de bandas

Question 4

¿Qué se necesita hacer para obtener una muestra pura de RNA?

Answer 4

Separarlo de sus otros componentes moleculares (lípidos, proteínas y DNA)

Question 5

¿Cómo debe estar el gel de agarosa para la separación por electroforesis?

Answer 5

Disuelto en buffer M.O.P.S para estabilizar el RNA , y se le añadirá formaldehído para evitar estructuras secundarias

Question 6

¿Qué se le añade para que pueda ser visible?

Answer 6

Colorante de carga

Question 7

Proceso por el cual dos hebras sencillas de DNA, RNA o un híbrido se unen por complementariedad de sus bases nitrogenadas, formando una doble cadena

Answer 7

Hibridación

Question 8

¿Qué son las sondas?

Answer 8

Ácidos nucleicos sintetizados de cadena sencilla que, por complementariedad de sus bases van a hibridar en la muestra sencilla de RNA de interés

La sonda está marcada para poder detectar al RNA

Question 9

Tipos de marcaje de sondas

Answer 9

• Radioactivo
• No radioactivo

Question 10

Aplicaciones de investigacion de northern blot

Answer 10

Monitoreo de la expresión génica y procesamiento de los diferentes RNA´s

Question 11

Aplicaciones clínicas de Northern Blot

Answer 11

Diagnósticos oportunos para el cáncer