Chromatographie Flashcards
Nomme 3 Dés/Avantages de la chromatographie par rapport au immunoessaies.
Avantages:
- Plusieur analytes sur même échantillons
- Réactifs pas cher
- Adaptable pr nouveau dosage
Désavantage:
- Plus long
- Appareils complexe et couteux
- Entrainement spécial des techs
Qu’est-ce que la chromatographie?
La chromatographie est une méthode dans laquelle les composants d’un mélange sont séparés en fonction de leurs interactions différentielles avec deux phases chimiques ou physiques: une phase mobile et une phase stationnaire
Qu’est-ce qu’un plateau théorique?
C’est la zone requise pour qu’une substance s’équilibre entre la phase mobile et la phase stationnaire
Qu’est-ce que le facteur de rétention (k)?
Comment est-il calculé?
Temps qu’une substance passe dans la phase stationnaire versus le temps passé dans la phase mobile
Calcul : k = (tR-tM)/tM
tR = temps de rétention
tM = temps mort
Qu’est-ce que la sélectivité (alpha) en chromatographie?
Comment est-elle calculée
La sélectivité est la différence d’affinité de 2 substrats pour la phase stationnaire
Calcul : a= kB/kA
Qu’est-ce qui détermine la sélectivité et le facteur de rétention en chromatographie (3)?
- Les composés qui sont séparés
- La phase stationnaire
- La phase mobile
Comment le nombre de plateaux théoriques influence-t-il l’efficacité de la colonne? Et la hauteur?
Plus le nombre de plateaux théoriques (N) augmente, plus l’efficacité augmente
Plus la hauteur des plateaux théoriques (H) diminue, plus l’efficacité augmente
Que veut-on dire quand on parle de hauteur de plateau théorique (H)?
On fait référence à la longueur (distance à parcourir) requise dans la colonne pour que l’équilibre entre la phase stationnaire et la phase mobile ait lieu.
Plus H est élevé, plus le composé doit parcourir une grande distance dans la colonne pour s’équilibrer.
Comment peut-on calculer le nombre de plateau théorique d’une colonne à partir d’un chromatogramme?
N = 16(tR/Wb)2 OU N = 5,545 (tR/Wh)2
tR = temps de rétention
Wb = largeur du pic à la base
Wh = largeur du pic à mi-hauteur
Écrire l’équation de van Deemter. Définir chacun des termes de l’équation
H = A + B/µ + Cµ
µ = débit
A = Diffusion d’eddy
B = Diffusion longitudinale
C = Transfert de masse (phase mobile et phase stationnaire)
Qu’est-ce que la résolution (Rs) en chromatographie? Comment se calcule-t-elle?
Représente la capacité à séparer convenablement 2 substances
Rs = 2 (tRB-tRA)/(WbA+WbB)
Quels facteurs chromatographiques affectent la résolution des pics (3)?
Rs augmente si :
- Nombre de plateaux théoriques augmente
- La sélectivité augmente
- Le facteur de rétention augmente
Vrai ou Faux : La résolution idéale est > 0,8, puisqu’une résolution de > 0,8 permet la séparation des pics par atteinte de la ligne de base.
FAUX :
- La résolution idéale** est **> 2
- Une résolution > 1,25** permet la séparation par atteinte de la **ligne de base
- Une résolution de > 0,8** est la résolution **minimale pour quantifier 2 pics symétriques de même hauteur
Quelle est la différence entre une quantificaiton externe et une quantification interne en chromatographie?
Quantification externe : Concentration de l’analyte déterminée en fonction de l’aire du pic de l’analyte
Quantification interne : Utilisation d’un standard interne pour normaliser la quantification (Concentration déterminée en fonction du ratio de l’air des pics de l’analyte / SI)
Identifier les 2 modes d’injection en A et B.
À quel type de chromatographique appartiennent ces types d’injection?
A : Mode Split
B : Mode Splitless
Chromatographie gazeuse
Qu’est-ce que le septum en GC?
Sert d’interface entre l’injecteur et le système chromatographique
Consommable qui doit être changé et qui peut affecter la qualité de l’injection
2 types de colonnes sont utilisés en GC. Lesquelles et qu’elle est la différence?
Colonnes garnies (packed) : tube métallique rempli de phase stationnaire, moins efficaces, utiles lorsqu’une grande quantité d’échantillon est requise
Colonnes capillaires : Capillaire de silice avec revêtement de phase stationnaire (faible épaisseur), plus efficace et meilleure résolution. Colonnes les plus utilisées
Quel paramètre est le plus important en GC pour optimiser l’efficacité de la chromatographie:
A - La phase stationnaire
B - La température
C - La phase mobile
D - Le débit
B - La température
Le contrôle précis des températures de la colonne et de l’injecteur est nécessaire pour obtenir des performances optimales et des résultats fiables dans un système GC.
Conditionnement thermique des colonnes avant leur première utilisation.
Nommer 4 types de détecteurs utilisés en GC. Lequel est le plus sensible? Lequel est le plus utilisé?
- FID : Détecteur à ionisation de flamme
- NPD : détecteur thermo-ionique
- ECD : DÉtecteur à capture d’électrons
- MS : Spectromètre de masse
Le plus sensible : ECD
Le plus utilisè : FID
Quel est le principe de détection d’un détecteur FID ?
Détecteur à ionisation de flamme : Détecteur de masse utilisé en GC
- Composés élués mélangés avec H2 et brûlés par une flamme entourée d’air et d’O2.
- Faible proportion de molécules brulées libère des électrons.
- Courant généré est mesuré. Réponse proportionnelle au nombre de carbone
Quel est le principe de détection d’un détecteur NPD?
Détecteur thermo-ionique :Reconnaît sélectivement l’azote et le phosphore. Détecteur de masse utilisé en GC.
- Composés élués mélangés avec H2 et brûlés par une flamme entourée d’air et d’O2 (comme FID)
- Utilisation d’une bille de métal alcalin chauffée (Rubidium ou chlorure de césium) qui émet des électrons (courant de base).
- Les composés azotés et phosphorés partiellement brûlés sont adsorbés à la surface de la bille, ce qui augmente l’émission d’électrons
- Courant généré mesuré.
Nommer les différents types de chromatographie liquide (5)
- Chromatographie d’affinité
- Chromatographie d’exclusion de taille
- Chromatographie d’adsorption
- Chromatographie échangeuse d’ions
- Chromatographie de partage
Vrai ou Faux : En chromatographie d’absorption, la force éluotropique de la phase mobile fait référence à la capacité de liaison au support solide. Ainsi, plus la force éluotropique d’une phase mobile est élevée, plus son pouvoir d’élution est important.
VRAI
Quel est le principe de rétention de la chromatographie d’adsorption?
Principe de rétention : compétition entre l’analyte et la phase mobile pour lier le support solide (les 2 peuvent adhérer au support solide). Composés séparés en fonction de leur adsorption/désorption à un support solide
