Aula 18 - Núcleo Celular Flashcards
Hematoxilina
Corante básico
Evidência componentes ácidos (basofilos)
Método de feulgen
Método para corar as moléculas de DNA no núcleo
Hidrólise com ácido clorídrico Remoção de DNA Grupos aldeídos livres Reação com reagente de Schiff (PAS) Moléculas de DNA coradas a vermelho
DAPI
corante fluorescente azul
Marca núcleos
Usado em imunofluorescencia e Microscopia de fluorescência
Isolamento do núcleo
Ultracentrifugacao: o núcleo vai ser o primeiro a sedimentar
Purificação da fração: depois faz-se centrifugação contra gradiente de concentração de sacarose
TEM
Permite visualização de:
Invólucro nuclear
Heterocromatina perinuclear e perinucleolar
Cromatina constitutiva
Região do DNA que está sempre condensada em todas as células
Domínios de heterocromatina + lâmina
Passam a estar associados ao nucleolo
Método da contrastação regressiva de EDTA
EDTA: liga e retira catioes bivalentes
Permite ver ribonucleoproteinas
Regiões claras: ricas em DNA, junto do nucleolo e a periferia do núcleo
Regiões escuras: ricas em RNA
Funções do nucleolo
Síntese de rRNA
Montagem de Subunidade de ribossomas
Formação e amadurecimento de ribonucleoproteinas por exemplo a telomerase, que é responsável pela replicacao das extremidades dos telomeros
Molécula de rna + componente proteica de telomerase
Feita no nucleolo
Bromouridina
Integra se no RNA
Ligada a anticorpo fluorescente
Permite localizar os focos de transcrição
TEM permite localizar
Fibrilas pericromaticas
Grânulos pericormaticos
Fibrilas pericromaticas
Locais de transcrição onde é sintetizado o mRNA e o tRNA no nucleoplasma pela RNA polimerase II e III
Grânulos pericromatinicos
Contém transcriptos primários da RNApolimerase II que não sofreram splicing
Grânulos intercromatinicos
Locais de reserva de pequenos RNA’s (fatores de splicing que não estão a ser usados)
Corpo espiralado ou de Cajal
Constituído por coilina e fibrihina
Contém scaRNA’s
Intervém no:
Amadurecimento e reciclagem dos pequenos RNA’s
Corpos nucleares PML
Responsável por:
Ativação de mecanismos de reparação do DNA
Amadurecimento de p53
Modificação de fatores de transcrição
Isolamento da matriz celular/ nucleoesqueleto
Detergente: remove as membranas do núcleo
DNAases - enzimas que degradam o DNA
Tampões de alta e baixa força ionica
Invólucro nuclear
Bicamada fosfolipidica + lâmina nuclear fibrosa +complexos poro nuclear (CPN) que permitem passagem de moléculas citoplasma-núcleo
A membrana ext do no núcleo está em continuidade física com o RER
CPN (complexos poro nuclear)
Comunicação entre citosol e nucleoplama
Difusão passiva
Simetria octaedrica
LBR (receptores e lamina B) e a empina vão estabilizar a lâmina nuclear
Nucleoporinas
Estruturais: formam complexo Y (structural nucleoproteins - scNUP)
Membranares: ligam-se as membranas do invólucro nuclear
FG: apresentam prolongamentos const p resíduos de fenilalanina e glicina
Carioferinas
Interagem com resíduos FG (fenilalanina e glicina) para permitir passagem de moléculas maiores
Importinas e exportinas
Importação nuclear
Molécula + importina
Importação
Importina + RAN GTP que leva importina de volta para citosol
GTP passa a GDP
Exportação nuclear
Exportinas reconhecem sinal NES (nuclear export signal)
Transporte das subunidades dis ribossomas e tRNA
Exportina T- medeia transporte de tRNA
Exportina 1- medeia transporte das subunidades dos ribossomas
Transporte do mRNA
Não depende de RAN GTP
Enzima dbp5
Funciona como helicase
No citoplasma dissocia o mRNA das proteínas a que está associado com gasto de ATP
