Aula 17 - Transcrição : rRNA e tRNA Flashcards
No nucleolo ocorre
Síntese dos rna ribossomais (Rna polimerase I)
Associação dos rRNA a proteínas
tem aspeto heterogéneo em TEM
Componente fibrilar denso
Estrutura mais eletrodensa
Síntese das moléculas de Rna ribossomal (ativamente)
Constituído por fibrilas
Centro fibrilar
Região menos eletronodensa
Rodeado pelo componente fibrilar denso
Componente granular
Pequenos grânulos em redor (subunidades dos ribossomas em processo de amadurecimento)
Amadurecimento do DNA ribossomal vindo do CFD
Variação do tamanho dos nucleolos
Pequenos em telofase: quando rna polimerase I entra em atividade e começa a sintetizar RNA ribossomais
Interfase tem um ou dois grandes nucleolos por célula
Quanto maior a síntese de rRNA maior o nucleolo
Organizadores nucleolares (NOR)
Regiões do genoma que contém os genes que codificam o RNA ribossomal
Microscopia de luz: com coloração da sais de prata
Presentes em apenas alguns cromossomas
Metafase: constrição primária
Unidade transcritiva
DNA que codifica para rRNA é transcrito em simultâneo por várias unidades de rna polimerase I
Ribossomas
Subunidades pequena: 18S
Subunidade grande: moléculas de 5.8S, 28S e 5S
DNA spacer
Região no DNA entre unidades transcritivas, não é transcrito
Genes para o rRNA
Aparecem em tandem arrays
Componente fibrilar denso: unidades transcritivas em transcrição ativa
Centro fibrilar: unidades transcritivas não transcritas ativamente
NORC
Proteína que tem papel importante na pressão de genes que codificam o rna ribossomal
Liga-se a enzimas que vão desacetilar/metilar histonas do DNA que codificam o rna - fica em heterocromatina
Promotores da rna polimerase I
Permitem o início da sua transcrição
UCE (upstream control element)
A montante
Upstream binding factor (UBF): reconhece-o (fator de transcrição geral)
CORE Element
No local de início de transcrição
Selectivity factor one (SL1): reconhece-o (faz dele parte a TATA binding protein, o q não faz sentido pq a TATA box não participa aqui)
Transcription initiation factor 1A (TIF-1A)
ligam-se após ligação do selectivity factor one
Permite ligação da RNA polimerase I (início da transcrição)
Outros fatores de transcrição
Caseína cinase 2: fosforila alguns fatores aumentando a sua atividade
Sirtuina 7: desacetilase de histonas, que neste caso intervém na ativação
Actina e misógina nuclear
Topoisomerase 1: permite o alívio do sobre-enrolamento do DNA
Clivagem
Parte do processamento
Corte de rna (primeiro na 3’)
Percursor grande 45S
Modificação
Metilacao de bases e riboses
Pseudouridinacao- rotação do anel da uridina, sendo transformada em pseudouridina
Pequenos RNA’s nucleolares (snoRNA)
intervém no amadurecimento/ processamento das moléculas de rna
U3: clivagem de ext 5’ do transcrito primário
U8: clivagem do 5,8S
U14: clivagem do 28S
U22: clivagem do 18S (subunidade pequena)
Complexo MRP: corta e separa o 18 dos outros dois
Small nucleolar RNAs (snoRNAs)
Associados a proteínas - small nucleolar ribonucleoprotein (snoRNP)
Reconhecimento dos nucleotideos que é necessário modificar através de complementaridade de bases (como no splicing dos RNA mensageiros)
Pseudouridinacao - box H e ACA
Metilacao - boxes C e D
Pseudouridinacao
Emparelhamento por complementaridade de bases
Uracilo não emparelha
Exposição a enzimas que o vão transformar em pseudouridina
Metilacao - boxes C e D
Emparelhamento por complementaridade de bases
Expõem nucleotideos a enzima (metiltransferase)
Ligação do grupo metilo aqueles nucleotideos e aos pequenos rna que integram a box A e ACA
Não há Emparelhamento completo
Deixam um uracilo exposto as enzimas que vão transformar uracilo em pseudouridina
Da-se Rotação do anel
Estrutura dos ribossomas
80S quando associadas em eucariontes
70S procariontes
60S subunidade grande separada (moléculas de 28,5,8 e 5S htranscrita pela rna polimerase III) e mais 50 proteínas)
40S- subunidade pequena separada (molécula de 18S mais 33 proteínas)
Exportação e modificações no citosol
As subunidades so se tornam funcionais no citosol para que não haja tradução no núcleo
Subunidade pequena exportada através de CPN
No citosol há a última clivagem (18S) e metilacoes de Adenina que levam a formação de Subunidade funcional
Subunidade grande demora mais a ser exportada, transportada primeiro para nucleoplasma e depois pelo para o citosol
Fatores de exportação
Nmd3
Nxt1 (tbm para os mRNAs)
Ran-GTP: lig da grande Subunidade a exportina 1
A dele só das seqs de DNA que estão upstream do local de início da transcrição pela RNA polimerase III não afetam a sua atividade
…
Promotores da RNA pol III
Downstream
Box A e Box BM promovem síntese dos tRNAs
Box C promove síntese de outros RNAs
Estrutura de RNAs de transferência
Anda do anticodao
Anda D e ansa T - correspondem no DNA a regiões que servem de promotor
Início de transcrição pela rna polimerase III
lig de fatores de transcrição a promotores
Lig de fatores de transcrição a seguir
Ligação e posicionamento da RNA polimerase III
Transcrição do gene para tRNA
Box A e B - TFIIC - TFIIB - RNA polimerase III
Transcrição do gene Lara o 5S-rRNA
Box C - TFIIA - TFIIC - TFIIB - RNA polimerase III
Transcrição do gene Lara o U6 SnRNA
PSE e TATABOX - TFIIB like - SNAPc - RNA polimerase III
TFIIB e TFIIB like
Tem como uma das subunidades a TATA binding protein (faz sentido pq TATABOX funciona como promotor)
Amadurecimento dos tRNA
Clivagem da ext 5’ catalisado p RNAase P (ribozima)
Substituição dos 2 uracilo na ext 3’ pela sequência CCA
Modificação de 10% das bases
Splicing: catalisado por endonucleases
Nucleolo
Onde ocorre todo o processamento do rRNA
Focos de replicacao e focos de transcrição
They’re there?
Pequenos corpos nucleares
Funcionamento e na regulação das funções
Corpos de Cajal
Corpos espiralados
Coiled bodies
Funções:
Amadurecimento dos pequenos RNA
Reciclagem dos pequenos RNA
Constituídos:
Pequenos RNA em amadurecimento
Coilina
Fibrilharina
Microscopia:
Coráveis em método de cajal
Estruturas espiraladas em TEM
Grânulos intercromatinicos/ Speckles
Aspeto ponteado
Reserva de pequenos RNA- só quando são necessários para o splicing dos mRNA
