Aula 15 - Transcrição Do mRNA

Question 1

Ribozima

Answer 1

Enzima de RNA que catalisa reações químicas

Centro ativo: precisa de assumir estrutura tridimensional (acolher substratos)

Question 2

Ribonucleoproteinas

Answer 2

RNA + RNA binding proteins

Sem proteínas é degradado por RNAses

RNA é instável por ter mais um hidroxilo

Question 3

RNApolimerase II

Answer 3

Catalisa transcrição
Estabelecem ligs fosfodiester
Proofreading

Não precisa de primers

Question 4

Transcriptase bubble

Answer 4

Abertura de dupla cadeia de DNA por RNA polimerase

Começa no +1 e faz contagem crescente

Upstream: contagem negativa, regula processo de transcrição
Downstream: contagem positiva, que é transcrita

Question 5

Procarioticas

Answer 5

Só há uma RNA polimerase

Question 6

RNA polimerase I, II e III

Answer 6

I: Pre mRNA
II: mRNA, snRNA, miRNA
III: tRNA, 5S rRNA, snRNA U6, 7S RNA

Question 7

CTD (carboxylate terminal domain)

Answer 7

Faz parte da RNA polimerase II
Amadurecimento de RNA mensageiro
Grande atividade - hiperfosforilada

Question 8

Amanitina

Answer 8

RNA polimerase:

I: insensível
II: inativada pela amanitina
III: concentraçoes elevadas

Question 9

Fatores de transcrição

Answer 9

Reconhecem e ligam rna polimerase II para que inicie transcrição

TFII

TFIID liga a região de início e reconhece TATA: TBP liga a TATA box
TFIIB ligase
TFIIF ligase com rna polimerase II com cadeia CTD desfosforilada
TFIIE e TFIIH ligam-se
Complexo pre iniciação
TFIIH é helicase e cinase (fosforila CTD)
desagregação

Question 10

TATA box

Answer 10

Localizada upstream

Rica em A e T
mais fácil de abrir
Lida por TFIID

Question 11

Genes de housekeeping

Answer 11

Transcritos em taxas baixas
Sem picos de ativação

CpG islands: promotores para transcrição destes genes (regiões de C e G Upstream)

Não estão enrolados a volta de nucleossomas, ou seja, estão mais acessíveis

Ex: actina e tubolina

Question 12

Promoters proximal elements

Answer 12

Regiões reguladoras a 100 ou 200 pb do início da transcrição

Question 13

Enhancers

Answer 13

Regiões reguladoras muito longe do local de início
Podem estar dentro de introes
Fazem parte do gene - condicionam a sua atividade

Question 14

Mediador

Answer 14

Proteína que liga os enhancers ao complexo de iniciação de transcrição

Question 15

Super- enrolamento

Answer 15

Gerado pela rna polimerase a downstream da transcrição

Aliviado por Topoisomerases

Question 16

Processamento do mRNA

Answer 16

Ocorre concomitantemente com síntese

Cadeia CTD fosforilada: transporta fatores envolvidos no capping, splicing, clivagem e poliadenilacao

Question 17

Capping

Answer 17

A partir do momento q mRNA começa a sair da região globular de rna polimerase II

Ligação a uma 7-metilguanina: liga-se através de 3 grupos fosfato ao carbono 5’

Hidrólise do grupo fosfato
Ligação do GTP
Ligação de mais 2 fosfatos
Ligação da guanosina (metiltransferase)
Metilacao da ribose do 1 nucleotideo do mRNA

Question 18

Sinal de poliadenilacao

Answer 18

Paragem da transcrição
Seq AAUAA

Aparece seguido de região rica em guanina e uracilo

Ligação de fatores de clivagem (CPSF, CStF, CFI, CFII)
Ligação a PAP (poly-A-polimerase)
Clivagem de região rica em G/U
PAP catalisa adição de Adenina, adiciona ATP, forma cadeia poliadenilada na extremidade 3’

Question 19

mRNA de histona

Answer 19

Não tem cadeia poli A na extremidade 3’

Question 20

Splicing

Answer 20

Remoção de introes

Reações de transesterificacao

Question 21

Reações de transesterificacao

Answer 21

Ligações fosforescer passam de um sítio para o outro

Lig fosfoester entre o branch point A (Adenina) e o fosfato da extremidade 5’ do intrao
Formação do lariat
Segunda ligação fosfoester entre 5’ do exao 2 e 3’ do exao 1
Ligação de exoes

Question 22

Nucleotideos fundamentais do intrao para que splicing ocorra

Answer 22

Extremidade 5’: G, U, A/G
Extremidade 3’: A G
Branch point: Adenina a 150bases da ext 3’

Question 23

SnRNA/ snRNP (pequenos RNA/ ribonucleoproteinas)

Answer 23

Medeiam splicing do pre-mRNA
ricos em uracilo
Catalisam transesterificacao

Mutação nas sequências: splicing bloqueado
Mutação compensatória: mutação nos SnRNA para permitir splicing

SnRNA U1 emparelha com extremidade 5’ do intrao
Ligação do SF1 na proximidade da Adenina
Ligação do U2AF
SnRNA U2 emparelha com o branch point deixando Adenina saliente
Primeira reação de transesterificacao 
SnRNA U4, U5 e U6 ligam 2 exoes
Segunda transesterificacao 
Degradado o intrao

Question 24

Spliceossoma

Answer 24

Conjunto dos snRNP
Reconhece sinais de splicing
Junta extremidades de intrao
Providencia atividade enzimática para os dois passos da reação

Question 25

Rearranjos durante o splicing

Answer 25

Gasto de energia
Subistuicao de li U1 por U6
Substituição da lig do BBP pelo U2 durante 2 reação

Question 26

Proteínas SR

Answer 26

reconhecem e marcam exoes
Ricas em seringa e arginina
Ligam a exonic splicing enhancers

Question 27

Mutações nas exonic splicing enhancers

Answer 27

Perda de exoes

Question 28

Transcrição do mRNA, poliadenilacao e splicing

Answer 28

Ocorrem concomitantemente no núcleo

Question 29

Mecanismos alternativos de splicing

Answer 29

Trans splicing
Self splicing
Splicing alternativo

Question 30

Trans-splicing

Answer 30

Em protozoários

SL snRNP transporta exao que passa a ser incluído no rna final

Question 31

Self splicing

Answer 31

Sem enzimas, ribozima

Quebra e forma de ligs covalent sem intervenção de enzima

Question 32

Splicing alternativo

Answer 32

Múltiplas proteínas a partir de um mesmo gene

Ex: fibronectina e fibroblasto

Question 33

Transporte do mRNA

Answer 33

Para o citoplasma através de complexo poro nuclear
CBC substituído por fatores de iniciação da tradução
Proteínas que ligam a cadeia poly A são substituídas por outras

Question 34

Cleevage alternativo

Answer 34

mRNA pode ser clivado mais cedo ou mais tarde - diferentes seq de nucleotideos - diferentes proteínas