Aula 15 - Transcrição Do mRNA Flashcards
Ribozima
Enzima de RNA que catalisa reações químicas
Centro ativo: precisa de assumir estrutura tridimensional (acolher substratos)
Ribonucleoproteinas
RNA + RNA binding proteins
Sem proteínas é degradado por RNAses
RNA é instável por ter mais um hidroxilo
RNApolimerase II
Catalisa transcrição
Estabelecem ligs fosfodiester
Proofreading
Não precisa de primers
Transcriptase bubble
Abertura de dupla cadeia de DNA por RNA polimerase
Começa no +1 e faz contagem crescente
Upstream: contagem negativa, regula processo de transcrição
Downstream: contagem positiva, que é transcrita
Procarioticas
Só há uma RNA polimerase
RNA polimerase I, II e III
I: Pre mRNA
II: mRNA, snRNA, miRNA
III: tRNA, 5S rRNA, snRNA U6, 7S RNA
CTD (carboxylate terminal domain)
Faz parte da RNA polimerase II
Amadurecimento de RNA mensageiro
Grande atividade - hiperfosforilada
Amanitina
RNA polimerase:
I: insensível
II: inativada pela amanitina
III: concentraçoes elevadas
Fatores de transcrição
Reconhecem e ligam rna polimerase II para que inicie transcrição
TFII
TFIID liga a região de início e reconhece TATA: TBP liga a TATA box
TFIIB ligase
TFIIF ligase com rna polimerase II com cadeia CTD desfosforilada
TFIIE e TFIIH ligam-se
Complexo pre iniciação
TFIIH é helicase e cinase (fosforila CTD)
desagregação
TATA box
Localizada upstream
Rica em A e T
mais fácil de abrir
Lida por TFIID
Genes de housekeeping
Transcritos em taxas baixas
Sem picos de ativação
CpG islands: promotores para transcrição destes genes (regiões de C e G Upstream)
Não estão enrolados a volta de nucleossomas, ou seja, estão mais acessíveis
Ex: actina e tubolina
Promoters proximal elements
Regiões reguladoras a 100 ou 200 pb do início da transcrição
Enhancers
Regiões reguladoras muito longe do local de início
Podem estar dentro de introes
Fazem parte do gene - condicionam a sua atividade
Mediador
Proteína que liga os enhancers ao complexo de iniciação de transcrição
Super- enrolamento
Gerado pela rna polimerase a downstream da transcrição
Aliviado por Topoisomerases
Processamento do mRNA
Ocorre concomitantemente com síntese
Cadeia CTD fosforilada: transporta fatores envolvidos no capping, splicing, clivagem e poliadenilacao
Capping
A partir do momento q mRNA começa a sair da região globular de rna polimerase II
Ligação a uma 7-metilguanina: liga-se através de 3 grupos fosfato ao carbono 5’
Hidrólise do grupo fosfato Ligação do GTP Ligação de mais 2 fosfatos Ligação da guanosina (metiltransferase) Metilacao da ribose do 1 nucleotideo do mRNA
Sinal de poliadenilacao
Paragem da transcrição
Seq AAUAA
Aparece seguido de região rica em guanina e uracilo
Ligação de fatores de clivagem (CPSF, CStF, CFI, CFII)
Ligação a PAP (poly-A-polimerase)
Clivagem de região rica em G/U
PAP catalisa adição de Adenina, adiciona ATP, forma cadeia poliadenilada na extremidade 3’
mRNA de histona
Não tem cadeia poli A na extremidade 3’
Splicing
Remoção de introes
Reações de transesterificacao
Reações de transesterificacao
Ligações fosforescer passam de um sítio para o outro
Lig fosfoester entre o branch point A (Adenina) e o fosfato da extremidade 5’ do intrao
Formação do lariat
Segunda ligação fosfoester entre 5’ do exao 2 e 3’ do exao 1
Ligação de exoes
Nucleotideos fundamentais do intrao para que splicing ocorra
Extremidade 5’: G, U, A/G
Extremidade 3’: A G
Branch point: Adenina a 150bases da ext 3’
SnRNA/ snRNP (pequenos RNA/ ribonucleoproteinas)
Medeiam splicing do pre-mRNA
ricos em uracilo
Catalisam transesterificacao
Mutação nas sequências: splicing bloqueado
Mutação compensatória: mutação nos SnRNA para permitir splicing
SnRNA U1 emparelha com extremidade 5’ do intrao Ligação do SF1 na proximidade da Adenina Ligação do U2AF SnRNA U2 emparelha com o branch point deixando Adenina saliente Primeira reação de transesterificacao SnRNA U4, U5 e U6 ligam 2 exoes Segunda transesterificacao Degradado o intrao
Spliceossoma
Conjunto dos snRNP
Reconhece sinais de splicing
Junta extremidades de intrao
Providencia atividade enzimática para os dois passos da reação
Rearranjos durante o splicing
Gasto de energia
Subistuicao de li U1 por U6
Substituição da lig do BBP pelo U2 durante 2 reação
Proteínas SR
reconhecem e marcam exoes
Ricas em seringa e arginina
Ligam a exonic splicing enhancers
Mutações nas exonic splicing enhancers
Perda de exoes
Transcrição do mRNA, poliadenilacao e splicing
Ocorrem concomitantemente no núcleo
Mecanismos alternativos de splicing
Trans splicing
Self splicing
Splicing alternativo
Trans-splicing
Em protozoários
SL snRNP transporta exao que passa a ser incluído no rna final
Self splicing
Sem enzimas, ribozima
Quebra e forma de ligs covalent sem intervenção de enzima
Splicing alternativo
Múltiplas proteínas a partir de um mesmo gene
Ex: fibronectina e fibroblasto
Transporte do mRNA
Para o citoplasma através de complexo poro nuclear
CBC substituído por fatores de iniciação da tradução
Proteínas que ligam a cadeia poly A são substituídas por outras
Cleevage alternativo
mRNA pode ser clivado mais cedo ou mais tarde - diferentes seq de nucleotideos - diferentes proteínas
