ZKT

Question 1

Zelllinien

Answer 1

Question 2

Kryokonservierung

Answer 2

Langsam: zu viele Elektrolyte ez –> grosse Kristalle und starke Dehydrierung

Schnell: kleinere Kristalle und weniger Dehydrierung.

Question 3

DMSO(Dimethylsulfoxid)

Answer 3

Führt zu kleineren und weniger Kristallen und weniger Membranschäden.
Es reduziert das osmotische Gefälle und verhindert eine Dehydration über 30%(lethal).
Diese kleinen Kristalle können migratorisch die Zellen schädigen.
Bei RT zelltoxisch.

Question 4

Zellgrösse Kryokons.

Answer 4

Grössere Zellen dehydrieren langsamer aber bilden mehr IZ-Kristalle.

Question 5

Transformation

Answer 5

Übertragen von freier DNA(Plasmid) auf/in eine Prokaryotische Zelle
-Elektroporation
-Calciumchloridmethode

Question 6

Transfektion

Answer 6

Einführung von DNA in eukaryotische Zelle.
OFt Visualisierung mit GFPs.

Question 7

CaPO4-Methode

Answer 7

Zellen in log.Phase
DNA fällts als Calciumpräzipitat aus und wird als CaPO4 per endozytose aufgenommen.

Question 8

Lipofektion

Answer 8

Kationische Liposomen binden die anionische DNA und transportieren diese so in die Zelle.
Grössere DNA-Stücke möglich, aber zelltoxische Adjuvanzien.

Question 9

Elektroporation

Answer 9

Durch elektrische Impulse wird die Zellmembran temporär durchlässig.

Question 10

CAR-T-Cells

Answer 10

T-Zellen werden mit chimären Antigen-Rezeptoren auf Krebszellen “abgerichtet”.

Question 11

Transduktion

Answer 11

DNA Übertragung durch Bakteriophagen oder Viren

Question 12

CAR-T-Cell herstellung

Answer 12

Zellen “ernten” durch Leukapherese, meist T-Lymph.
Zytokine für die Klonierung und Lenti- oder Gammaretroviren für die “Konditionierung” auf Krebs-AG.

Question 13

Vorteile CAR-T

Answer 13

Erkennen AG unabhängig von MHCI-Rezeptor. Auch schwach immunogene Zellen/Tumore werden bekämpft.

Solide Tumore sind bis anhin noch nicht gut bekämpfbar. ALLs sind das primäre Ziel.

Question 14

Side effects CAR-T

Answer 14

CRS: Zytokinfreisetzungssyndrom.
Zeichen für Anschlagen der Therapie aber kann tödlich enden.

Question 15

Ablauf CAR-T

Answer 15

1. Harvest/Leukapherese
2. Programming mit Viren
3. Klonierung
4. QK
5. Chemo
6. Infusion
7. Wirkung

Question 16

Phytohemagglutinin-L

Answer 16

Pflanzliches Lektin
Agglutiniert mit Oligosacchariden
Regt Mitose von T-Zellen an
In unserem Experiment sollte keine Wirkung nachweisbar sein( erst ab 1 mikrogramm, bei uns sinds max 0.5)

Question 17

Primärkultur
Zelllinie

Answer 17

Isolation, Explantation im ersten ZK-Gefäss

Question 18

hTERT-Zellen

Answer 18

Gesunde Zellen, aber infinit.
hTERT = humane Telomerase reverse transcriptase –> verhindert Telomerase-Verkürzung

Question 19

Mycoplasmen

Answer 19

Interferieren mit Zell-Stoffwechsel
Beispielsweise durch Arginin-Verbrauch –> Histonsynthese gestört –> zytogenetische Defekte und Chr.Aberrationen

Question 20

Mycoplasmen-Prävention

Answer 20

Oft interkulturelle Übertragung
Quarantäne für neue Linien/Kulturen
Medien/Puffer kontrollieren.
Exogene Kontaminationen beachten (mycoplasmen aus Mund beispielsweise)

Question 21

Primer Mycoplasmenkit

Answer 21

hochkonserviertes rRNA-Operon (16S rRNA) für Pos. und Plasmid DNA für interne QK.

Question 22

Formel Zellzählung

Answer 22

Z x VF x V x 10^4
Z= MW
VF= Verdünnungsfaktor
V= Volumen in dem die Zellen resuspendiert wurden
10’4= Kammerfaktor

Question 23

Calciumchlorid-Methode

Answer 23

Vorwiegend für Transformationen verwendet.
Wirtszellmembran wird in 0.1 M Cacl-Lösung permeabler –> DNA kann eindringen.

Question 24

Cell Banking

Answer 24

Zellinien werden oft nach 20-30 Passagen verworfen (Gen/Phenotype Drift)
Als Reserve von Primärkultur seed lots einfrieren.

Question 25

Nutzen ZKT

Answer 25

Toxikologie an Zellen
Impfstoffproduktion
Reduktion Tierversuche?
Tissue Engineering

Question 26

Reinigungsbereich

Answer 26

Gefliest
Laborautoklav
Spülmaschine
Trockenschränke
Spültisch
Wasseraufbereitungsanlage

Question 27

Vorbereitungsbereich

Answer 27

Arbeitstisch
Anschlüsse Gas; Wasser-; Elektro
Stauraum
pH-Meter
Magnetrührer
Kühlschrank 4-8
Gefrierschrank -20, TG -80
Direkter Zugang Sterilbereich

Question 28

Sterilbereich

Answer 28

SWB II
Brutschrank
Wasserbad
Zentrifuge
Umkehrmikroskop
Schränke

Question 29

Brutschrank

Answer 29

Thermometer (37)
96-Well-Platte mit 100 mikrol. dH20 für Raumbefeuchtung
Reinigung wöchentlich
Schale mit Seife, Wasser, Ethanol, rest nur Ethanol

Question 30

SWB II

Answer 30

HEPA-Filter
laminarflow(keine turbulenzen, steril)
top down
über 0,4m/s
Strom, UV
Edelstahl
Vakuum

Question 31

IMDM

Answer 31

Iscoves Modified Dulbeccos Medium
Phenolrot als Indikator
Vitamine, AS, Puffer, Selen, Kaliumnitrat

Question 32

FBS

Answer 32

GS
Enthält Zytokine, Wachstumsfaktoren und Bildungs/Transportproteine
Sowie Vitamine, Spurenelemente, AS.

Detoxifikation, Osmotisch, mechanischer Schutz

Question 33

D-PBS

Answer 33

4 Grad
PHospatbuffer salz
Waschlösung
pH stabilisierend

Question 34

Pen/Strep

Answer 34

GS
Penicillin/Streptomycin
Hemmt gram-neg/pos Bakterien

Question 35

L-Alanin-Glutamin

Answer 35

KS
Glutamin =Energie
Zellteilungshilfe

Question 36

Trypsin

Answer 36

GS
Hydrolase aus Pankreas, EDTA, Glucose
Spaltet Carboxylendebindungen von Lysin/Arginin

Question 37

Trypanblau

Answer 37

RT
Anionischer Diazofarbstoff
Anion bindet an Proteine und dringt nur bei toten Zellen ein.

Question 38

Jurkat-Zellen

Answer 38

m,14, akute t-zell leukämie
t-lymphoblast