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Biomol > Uso diagnóstico de anticuerpos > Flashcards

Uso diagnóstico de anticuerpos Flashcards

1
Q

Sistema inmune innato

A

Rápido inespecífico

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Q

Cuales son las barreras físicas del sistema inmune

A

Piel y mucosa

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3
Q

Sistema inmune adaptativo

A

Lento y específico

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4
Q

Qué célula secreta anticuerpos?

A

células plasmáticas <– linfocitos B

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5
Q

Células de la inmunidad adaptativa

A

Linfocitos B- céls plasmáticas
Linfocitos T - como efectores

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6
Q

Para que nos sirven los anticuerpos diagnósticos

A

Identificar patógenos
Saber los componentes de la sangre

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7
Q

¿Qué es ELISA?

A

Test inmunológico muy sensitivo

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8
Q

¿Para qué se utiliza ELISA?

A

Para la detección y cuantificación de:
- Anticuerpos
- Antígenos
- Proteínas
- Glucoproteínas
- Hormonas

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9
Q

Proteína elaborada por las células plasmáticas en respuesta a un antígeno

A

Anticuerpo

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10
Q

Composición anticuerpo

A

Se compone de:
* 2 cadenas pesadas (variable, puesta por linfocito B)
* 2 cadenas lígeras (constante)
Cada cadena pesada se une a la ligera mediante puente disulfuros.

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11
Q

¿A qué se une un anticuerpo?

A

A un solo antígeno específico

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12
Q

¿Para qué el linfocito B pone una cadena pesada diferente?

A

Es específico a cada parte de un microorganismo

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13
Q

¿Qué tipo de anticuerpos se utilizan?

A

De origen monoclonal

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14
Q

¿Cómo se logra realizar un ELISA?

A

Realizando complejos antígeno-anticuerpo

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15
Q

Cómo funciona la técnica ELISA

A

detecta antígenos específicos con anticuerpos marcados

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16
Q

Molécula ajena o tóxica para el organismo que, una vez dentro del cuerpo, induce en éste una respuesta inmunitaria

A

Antígeno

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17
Q

¿Qué provocan los antígenos dentro del cuerpo?

A

Formación de anticuerpos

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18
Q

¿Qué se requiere para realizar un ELISA? (4)

A

Anticuerpos primario y/o secundario
Antígeno
Buffer
Cromógeno o sustrato

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19
Q

Pasos generales para realizar un ELISA (4)

A
  1. Recubrimiento
  2. Bloqueo
  3. Detección
  4. Lectura final
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20
Q

¿Con qué se hace el recubrimiento?

A

Con un antígeno o anticuerpo

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21
Q

¿Con qué se hace normalmente el bloqueo?

A

Con la adición de albúmina de suero bovino [BSA]

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22
Q

¿Para qué sirve el bloqueo?

A

Para evitar que en las incubaciones se unan a la placa, de forma inespecífica otras moléculas que podrían interferir con los resultados

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23
Q

ELISA directo

A
  • El antígeno se inmoviliza sobre una placa
  • Se añaden anticuerpos primarios antígeno de interés con una enzima
  • Se pone el sustrato de la enzima para que reaccione–> señal visible (cambia color)
  • Ciclos de lavado intermedios
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24
Q

Funciones de la ELISA directo

A

Analizar la respuesta inmunológica
Baja sensibilidad
Mucho ruido de fondo ya que las proteínas y antígenos se quedan en el fondo

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25
ELISA indirecto
- Se inmoviliza el antígeno sobre una placa - Se pone un anticuerpo primario antígeno de interés (sin marcar) (sin la enzima) - Se pone un anticuerpo secundario para el primer anticuerpo marcado con la enzima - Se añade el sustrato reacciona con la enzima y te da una señal visible - Ciclos de lavado intermedios
26
Ventajas ELISA indirecto
Mayor sensibilidad Proceso más tardado Reacciones cruzadas Determinar la concentración total de anticuerpos en la muestra
27
ELISA tipo sándwich
- El anticuerpo de captura se inmoviliza - Se añade el antígeno de interés–> se une al anticuerpo de captura - Se añade un anticuerpo de detección - Se añade un anticuerpo secundario marcado con la enzima - Ciclos de lavado intermedios
28
Ventajas de la ELISA tipo sándwich
Análisis de muestras complejas Alta sensibilidad y especificidad
29
Tipo de ELISA más simple y rápido
ELISA directo
30
¿Por qué ELISA directo tiene un uso limitado?
Por su menor sensibilidad y la dificultad para obtener un conjugado que reconozca directamente al antígeno
31
¿Para qué sirven los controles?
Para saber que la muestra se realizó correctamente
32
Para qué se usa una citometría de flujo?
Identificar y cuantificar diferentes poblaciones celulares en suspensión
33
Qué son los cluster of differentiation?
antígenos en la membrana celular específicos para la célula o su linaje
34
Cómo funciona la citometría de flujo?
Marcan CD con anticuerpos las células pasan una por una en solución por un laser Dispersa el láser dependiendo del tamaño de la célula y sus proteínas expresadas (marcadas con anticuerpos)
35
Ejemplos de aplicaciones de la citometría de flujo
Leucemias Seguimiento de VIH linfomas
36
IgM
Respuesta a una infección aguda
37
IgG
Respuesta de memoria
38
¿Qué es Southern Blot?
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de DNA en una muestra de sangre o tejido
39
¿A partir de qué se busca el DNA en esta técnica?
A partir de DNA
40
Enzima que divide al DNA en fragmentos cerca o en de sitios de reconocimiento específicos dentro de moléculas conocidas como sitios de restricción
Enzima de restricción
41
Otro nombre para la enzima de restricción
Endonucleasa de restricción
42
¿Dónde se encuentran los sitios de reconocimiento?
Dentro de las moléculas de reconocimiento
43
¿Qué reconoce la enzima de restricción?
Una secuencia específica de nucleótidos
44
¿Qué produce la enzima de restricción?
Un corte de la doble cadena del DNA
45
¿Qué les pasa a los fragmentos de DNA producidos por el corte de la enzima de restricción?
Son separados por electroforesis
46
Cómo funciona una prueba Southern blot?
aísla DNA corta DNA con enzimas de restricción separa secuencias de DNA por electroforesis transfiere fragmentos de DNA del gel a una membrana de nitrocelulosa hibridación: añaden sondas marcadas radiactivamente para la secuencia de DNA de interés se guarda la membrana de nitrocelulosa con una película de rayos-x fuera de la luz para que las sondas radioactivas la marquen
47
Cuál es la diferencia del northern blot con el southern blot?
El northern blot es para RNA usa DNAsas antes de la electroforesis
48
Cuál es la diferencia del western blot con el southern blot?
El western blot detecta proteínas usa anticuerpos marcados en vez de sondas
49
Uso diagnóstico de Ac en infección viral
Ver respuesta de paciente a infección como respuesta inmune aguda o de memoria con IGs
50
¿Qué es Northern Blot?
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia de RNA específica en una muestra de sangre o tejido
51
¿Qué se usa en esta técnica para encontrar el RNA?
DNA
52
Pasos para realizar una Northern Blot
Extracción del RNA y separación por electroforesis Transferencia Northern a una membrana Hibridación del RNA con una sonda específica Detección de bandas
53
¿Qué se necesita hacer para obtener una muestra pura de RNA?
Separarlo de sus otros componentes moleculares (lípidos, proteínas y DNA)
54
¿Cómo debe estar el gel de agarosa para la separación por electroforesis?
Disuelto en buffer M.O.P.S para estabilizar el RNA , y se le añadirá formaldehído para evitar estructuras secundarias
55
¿Qué se le añade para que pueda ser visible?
Colorante de carga
56
Proceso por el cual dos hebras sencillas de DNA, RNA o un híbrido se unen por complementariedad de sus bases nitrogenadas, formando una doble cadena
Hibridación
57
¿Qué son las sondas?
Ácidos nucleicos sintetizados de cadena sencilla que, por complementariedad de sus bases van a hibridar en la muestra sencilla de RNA de interés La sonda está marcada para poder detectar al RNA
58
Tipos de marcaje de sondas
Radioactivo No radioactivo
59
Aplicaciones de investigación de northern blot
Monitoreo de la expresión génica y procesamiento de los diferentes RNA´s
60
Aplicaciones clínicas de Northern Blot
Diagnósticos oportunos para el cáncer
61
¿Qué es Western Blot?
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido
62
¿A partir de qué se busca la proteína en esta técnica?
Anticuerpos
63
Pasos para realizar Western Blot
Sustraer las proteínas del tejido deseado (ej. sangre) -> ponerlas en un gel SDS -> separar las proteínas según su peso molecular -> transferir las proteínas a una membrana PVDF (mediante un campo eléctrico o químico, para poder detectar la proteína de interés) -> detectamos la proteína mediante un anticuerpo de forma específica -> una vez unido el anticuerpo a la proteína, se usa algún método de fluorescencia o luminiscencia para detectar la proteína
64
¿Qué tipo de anticuerpo es utilizado en este estudio?
Monoclonal

Biomol (40 decks)

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