DNA recombinante Flashcards
Transformación bacteriana
Es cuando una bacteria incorpora ADN libre de otra célula
Conjugación bacteriana
Es cuando se transfiere ADN de manera directa con otra bacteria por medio del pili
Transducción bacteriana
Cuando el vector es un bacteriofago
Que es un ADN recombinante
Un ADN que proviene de más de una fuente
Pasos para producir DNA recombinante
(6)
- Localizar el gen de interés
- aislar el gen
- insertar el gen en otra secuencia de DNA (vector)
- introducir DNA recombinado en célula huésped
- Confirmar que la célula huésped recibió el DNA recombinado
- dejar que la célula prolifere –> clona el gen
Enzimas de restricción
Endonucleasas que identifican DNA extraño y lo cortan
En las bacterias es un medio de defensa al cortar ADN exógeno
Originario de bacterias: degrada DNA extraño
Nomenclatura de las enzimas de restricción
Acrónimo en cursiva 3 letras
- 1: primera letra del género de la bacteria
- 2 y 3: nombre de la especie
Letra o número de acuerdo a la cepa
Número romano en orden cronológico que se aisló
Cómo se protegen las bacterias de sus propias enzimas de restricción?
metilan sus bases que son reconocidas por la enzima para poder diferenciarlas de DNA extraño
Clasificación de las enzimas de restricción
Tipo I: restricción y metilación. sitio corte a 1000 pb
Tipo II: reconoce secuencias palindrómicas. sitio de corte = sitio de reconocimiento. Uso en ing genética
Tipo III: restricción y metilación. sitio de corte de 20 - 30 pb
Tipo IV: reconocen DNA metilado
Tipos de cortes de las enzimas de restricción (2)
Cohesivos
Romos
¿Cómo son los cortes cohesivos?
Corta en nucleótidos diferentes cada cadena.
3 a 5 nt de diferencia
¿Cómo son los cortes romos?
Cortes simétricos en ambas cadenas
Cómo debe ser el corte para producir DNA recombinante?
con la misma enzima de restricción
Vector
Molécula que es capaz de aceptar DNA exógeno
Tipos de vectores
Clonación: para obtener grandes cantidades de ADN (almacena la secuencia y la duplica), ejemplos, bacteriofagos, fagemidos, plasmidos y cósmidos
Expresión: transcribe el gen, ejemplos, plasmidos y bacteriofagos