Análisis de Ácidos Nucleícos Flashcards
De qué depende el método de extracción de ácido nucleico?
- tipo de ácido nucleico a extraer
- organismo origen del ácido nucleico
- fuente de ácido nucleico
- técnica en la que se usará el ácido nucleico extraído
Es el primer paso para los estudios de biología molecular y para las técnicas de DNA recombinante, secuenciación y mutagénesis
Extracción de DNA
Fuente de ácidos nucleicos
Sangre
Suero
Biopsia
Plasma
Orina
Heces
LCR
Líquido sinovial
Líquido amniótico
Esputo
Semen
Raspado bucal
Folículo capilar
Etc
Pasos para la extracción del DNA (6)
- Lisis de la célula
- Separación
- Purificación
- Precipitación
- Lavado
- Disolución
Características del fenol cloroformo
Obtienes ADN de buena calidad y cantidad
Reactivos tóxicos
Pérdidas significativas de DNA (sino se decanta bien)
Cómo se extrae DNA de sangre por la técnica de fenol-cloroformo?
lisis: eritrocitos con cloruro de amonio y membranas con SDS
separación de proteínas y lípidos: con solvente fenol : cloroformo : alcohol isoamílico 25:24:1
precipitación: con solución salina y etanol 100%
lavado: con etanol 70% y agua
Cómo funciona la extracción de ADN por columnas o perlas?
Se extrae la muestra, se rompen células, se mete muestra en tubo con un filtro de membrana por debajo (que atrae el ADN y lo atora)
Se lava DNA para quitar desecho en el frasco debajo
Se quIta filtro para ver ADN
Técnica columnar ventajas /desventajas
No se obtiene tanto ADN pero es de más calidad
Cómo se puede cuantificar las muestras de DNA?
espectrofotometría
fluorometría (tinción Hoechst 33258)
Estudio por el que se hace pasar un haz de luz a través de la muestra
Espectrofotometría
En la espectrofotometría, mientras más luz se absorba…
Mayor concentración
Función espectrofotometría
Comprobar que DNA se ha extraído bien y no haya residuos
¿Cuánta luz puede absorber el DNA y RNA?
260nm
¿Cuánta luz absorben las proteínas?
280nm
¿Cuanta luz absorbe el fenol?
270 nm
