Manipulación de genes Flashcards
Las modificaciones de los genes son….
Al Azar
Características de la manipulación de genes
Variantes
Ectópicas
Inesperadas
Patrones de expresión subóptimas
¿Quiénes dan soluciones para modificar el genoma eucariótico?
La especie procariota
Tipos de manipulación de genes
DNA recombinante
Microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados
Modificaciones genéticas en células madre embrionarias
Transferencia de núcleo a célula somática (clonación)
CRISPR-Cas
Define qué es la microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados
La inyección del gen de interés en un huevo fertilizado de un animal donador
Cuando se tiene que hacer la microinyección de DNA en pronúcleos
Antes de la primera división
Desventajas de la microinyección de DNA
El gen se inserta al azar
- no todos sobreviven
- el gen no se expresa suficiente
Pasos del proceso de microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados
- Identificación del gen de interés
- Inserción del gen en el vector apropiado
- Microinyección del DNA dentro del pronúcleo de un huevo fertilizado
- Implantación del huevo microinyectado en una madre alquiler
- Desarrollo del embrión hasta su nacimiento
- Demostración que el gen ha sido incorporado de manera estable
- Demostrar que el gen se expresa
¿Dónde se integrará el nuevo gen?
Donde quiera, el promotor elegido ayuda expresar el nuevo gen
¿Para qué se usa la microinyección en pronúcleo?
Crear animales transgénicos
* Que ayuden a estudiar un gen en una patología
* Hacer transplantes
Cómo sirve la modificación CME?
Célulad madre se obtiene de blastocisto
Se mantienen las células en cultivo con factores que inhiben su diferenciación
Se manipulan con recombinación homóloga
Se reintroducen en blastocisto
¿De dónde se obtienen las células madre embrionarias?
De los blastocistos
Clonación
Transferencia de núcleo a célula somática
Cómo funciona la clonación?
Se extrae el núcleo de una célula somática del animal a clonar
se toma un óvulo no fecundado y se le quita el núcleo
combinas el núcleo del paso 1 y el óvulo del paso 2
desarrolla el embrión y se implanta
nace el clon
¿En qué etapa deben estar las células para la transferencia del núcleo a célula somática?
En G0 o G1
¿Por qué no funcionó la clonación en la oveja Dolly?
La célula estaba vieja con menor cantidad de telómeros.
Qué significa CRISPR?
clustered regularly interspaced short palindromic repeats
Repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciales
Qué son las proteínas Cas
proteínas asociadas a CRISPR
Qué separa a las secuencias CRISPR
proto espaciadores
secuencias adquiridas del DNA viral que infectó a la bacteria
Proceso de CRISPR-Cas
Pequeños fragmentos de DNA viral o plásmidos se incorporan al genoma bacteriano con gran cantidad de secuencias palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas
Transcripción y generación de un RNA no codificante (pre-crRNA), se procesa mediante unas proteínas (Cas)
Formación de crRNA maduro
Ensamble de proteína Cas y el crRNA
Aplicaciones de CRISPR-Cas9
Mutar DNA
Insertar DNA
Remover fragmentos de DNA
Diseño de terapias génicas
Terapia molecular
Terapia de células madre
Es la manera de manipular el genoma sin alterar la secuencia genética subyacente
CRISPR-Cas9
Diferentes funciones de proteínas CAS
Endonucleasas
Unir a CRIPSR
Muchas funciones
Une DNA de fago a CRISPR
