M1S4 méthodes d'études des cellules Flashcards
Connaître les principales méthodes d’étude des cellules
Qu’est ce qu’une biopsie ?
prélèvement des échantillons de tissus en provenance d’un organisme vivant
Quelle est la taille d’une cellule eucaryote?
généralement comprise entre 10 et 100 μm
Quelle est la résolution d’un microscope optique ?
La résolution de la microscopie optique va jusqu’à environ 200 nm (10-9m) et couvre ainsi la taille des cellules.
Quelle est la résolution d’un microscope optique ?
La résolution maximale descend à 0,2 nm. Cette dernière méthode peut visualiser les organites, des molécules de grosse taille ou tout du moins suggérer leur emplacement et leur configuration spatiale.
résolution jusqu’à 0,5 angström (0,5x10-10m).
Qu’est ce que la microscopie optique ?
Il s’agit d’études effectuées à l’aide d’un microscope, assemblage plus ou moins complexe de lentilles (généralement deux) et d’une source de lumière, permettant d’obtenir différents grossissements de l’image.
Qu’est ce qui est requis avant de pouvoir utiliser le microscope optique?
Son utilisation suppose une série de manipulations préalables, notamment
la coloration et la fixation, sans lesquelles les structures cellulaires resteraient transparentes et donc invisibles.
Elle nécessite également d’effectuer des coupes très fines permettant d’observer les structures de manière indépendante en limitant les superpositions.
Comment obtient t-on les tissus ou cellules à étudier ?
- biopsie
- prise de sang
Comment s’effectue la fixation ?
- par déshydratation
(doit être inclus dans une matière qui permette sa découpe, comme la paraffine ou certaines matières plastiques) - par congélation
(permet d’effectuer des coupes très fines, sans inclusion préalable)
Comment est découpé l’échantillon ?
A l’aide d’un microtome.
Ce qui permet d’observer les structures de manière indépendante en limitant les superpositions.
Quels sont les principales colorations?
l’hématoxyline-éosine,
le rouge carmin,
la résorcine
la fuschine
Que permet de visualiser un colorant basique ?
les structures acides (acides nucléiques, protéines)
Que permet de visualiser un colorant acide ?
les structures basiques
Qu’est ce qu’une cellule argentaffines ? exemple
Certaines cellules possédant des structures avec une forte affinité pour les dérivés d’argent, notamment les cellules endocrines.
Quelles préparations sont nécessaires avant l’utilisation du microscope électronique?
Elle ne nécessite pas de coloration au sens classique du terme, mais l’interaction potentielle des électrons avec la matière vivante, et notamment avec l’eau qu’elle contient, oblige à une préparation par
- déshydratation (lyophilisation)
- ou cryogénisation (congélation),
- suivie d’un traitement permettant d’accentuer le contraste entre différentes structures (par exemple l’ombrage métallique ou la cryofracture).
Quelles sont les deux techniques de microscopie utilisées ?
microscopie électronique à transmission
microscopie à balayage
En quoi consiste la microscopie électronique à transmission?
un faisceau d’électrons est transmis à travers un échantillon très fin à étudier
En quoi consiste la microscopie à balayage?
En utilisant un faisceau d’électrons émis depuis un canon et qui fonctionne comme une « sonde » qui explore l’échantillon. Ce dernier émet un rayonnement caractéristique qui est enregistré. La structure tridimensionnelle de l’image est donnée par des mouvements dans les trois plans auxquels est soumis l’échantillon
Sur quoi sont basées les méthodes d’études de la composition cellulaire?
techniques d’histochimie
techniques d’immuno-histochimie
technique d’hybridation in situ
et couplées à la microscopie
En quoi consiste la spectrométrie?
à décomposer une donnée en ses constituants,
comme décomposer un mélange de molécules en ses plus simples composantes selon leur masse et de préciser ainsi leurs caractéristiques chimiques (spectrométrie de masse) L’analyse est effectuée en phase gazeuse. Elle permet notamment de définir la composition chimique des molécules.
Qu’est ce que la chromatographie ?
Technique d’analyse dans laquelle l’échantillon contenant une ou plusieurs espèces est entraîné par un courant de phase mobile le long d’une phase stationnaire
Comment fonctionne la chromatographie ?
Le principe consiste à utiliser deux phases, une fixe et une mobile (liquide ou gazeuse). Une substance va ainsi être entraînée avec la phase mobile si son affinité pour cette phase est importante, ou va plutôt rester immobile si son affinité s’exerce davantage avec la phase fixe.
Selon le type de molécule recherchée, la phase mobile peut également être ionisée ou non.
De quoi peut être constitué la phase fixe lorsqu’on utilise un support papier ?
par l’eau.
Le support absorbe l’eau qui devient ainsi stationnaire et les molécules contenues se déplacent par capillarité selon leur solubilité, les plus solubles étant rapidement fixées au support.
Qu’est ce que la chromatographie d’exclusion ?
Une adaptation de la méthode de chromatographie.
Elle consiste à faire traverser une solution moléculaire par un milieu de billes poreuses. Le passage des molécules se fait alors en fonction de leur taille (masse moléculaire) ainsi que de leur configuration spatiale.
Qu’est ce que la chromatographie à échange d’ions?
Une autre version de la chromatographie. Elle utilise des résines chargée en anions ou cations. Les molécules de charge électrique opposée seront immédiatement fixées sur la résine alors que les molécules neutres ou de même charge resteront libres dans la phase mobile.
La résine chargée permet de retenir les ions complémentaires : une résine chargée positivement permet de retenir les anions et une résine chargée négativement permet de retenir les cations.
