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S.3 Genho&Protheo > Interacciones prot-prot > Flashcards

Interacciones prot-prot Flashcards

1
Q

¿El conocimiento de la secuencia nucleotídica y transcriptómica de una proteína es suficiente para conocer su función?

A

Falso
(Se requiere saber cómo interactúa con otras proteínas)

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2
Q

Clasificación de la interacción de las proteínas

A
  • Dominios de la misma cadena polipeptídica
  • Dominios de diferentes cadenas polipeptídicas
  • En complejos formados entre proteínas independientes
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3
Q

Metodologías para evaluar las interacciones proteína-proteína

A

Rayo X
ELISA
Doble híbrido Y2H
Microarreglo de proteínas
Microscopía electrónica
Inmunofluorescencia
FRET

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4
Q

Técnica Y2H (Yeast Two Hybrid Screening) ¿Qué es?

A

Es una técnica de doble híbrido en levadura que detecta la interacción entre dos proteínas.

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5
Q

Principio de funcionamiento
Y2H

A

El factor de transcripción (GAL4) se separa en dos partes:
Dominio de unión a ADN (BD).
Dominio de activación (AD).
-> ambos tienen que estar juntos para que se lleva a cabo la transcripción
-> Estos dominios se unen a las proteínas que se desea analizar.

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6
Q

Y2H audio explicativo**

que ocurre si hay interaccion entre prot

A

ver si proteínas interactúan biotina y estraptividina
-> para probarlo les pego una prot a lo que yo se que se va a unir al DNA
si hay interacción se unen las prot, y se pega los dos dominios del FT, el que se une al DNA y el que activa
-> como resultado tengo un transcrito
si no interactúan no hay transcripción

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7
Q

Si las proteínas interactúan ____________
Y2H

A

Los dominios del factor de transcripción se unirán.
Esto activará la transcripción de un gen reportero.

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8
Q

Resultado visible
Y2H

A

La interacción entre las proteínas se detecta al observar la transcripción del gen reportero

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9
Q

¿Qué es un gen reportero?

A
  • Es un gen cuya expresión se utiliza como indicador para determinar si ocurre un proceso específico, como la interacción entre proteínas.
  • Produce un producto fácilmente detectable (p.ej, una proteína fluorescente o una enzima) que confirma la activación transcripcional en el experimento.
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10
Q

Técnica FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)

A

Es un método microscópico que permite monitorear la interacción proteína-proteína en tiempo real.
-> mide la interacción en tiempo real; si su naturaleza es interactuar durante 1h, veo fluorescencia 1h

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11
Q

Marcaje de proteínas
FRET

A
  • Las proteínas se marcan con fluoróforos (donadores y aceptores).
  • Cuando interactúan, ocurre transferencia de energía y se observa fluorescencia.
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12
Q

Proceso experimental
FRET

A
  • CFP (Cyan Fluorescent Protein) se excita a 436 nm (luz azul) y emite a 480 nm.
  • Si hay interacción, YFP (Yellow Fluorescent Protein) (aceptor) se excita a 480 nm y emite luz amarilla.
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13
Q

Ventajas
FRET

A

Permite medir el tiempo de interacción entre las proteínas.

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14
Q

FRET describe los pasos

A
  • Fluoroforo donante se activa a longitud de onda de 436nm y emite luz a 480nm
  • como investigadores pongo longitud de onda de 436 para que florezca
  • si hay interacción, prot 2 ocupa un fluoroforo aceptor (acepta una energía del fluroforo donador)
    la fluorescencia que se emite del CFP es de 480nm, el recibe a 436
    -> coincide con la energia que ocupa el fluoroforo para activarse
    -> esa fluroescencia de 480 es absorbida por YFP y emite 535 (solo en el momento que están pegados interactuando); debe haber proximidad
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15
Q

Modificaciones postraduccionales

A

Procesos que alteran la estructura de las prot posterior al proceso de traducción

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16
Q

¿Qué pueden incluir las modificaciones postraduccionales?

A
  • Adición de grupos químicos
  • Cortes de cadena polipeptídica
  • Plegamiento
17
Q

Las modificaciones postraduccionales determinan _________

A
  • Actividad
  • Localización
  • Interacciones con otras proteínas
    -> Ej. cascada de cinasas se regula mediante fosforilaciones
18
Q

Modificaciones postraduccionales en el análisis proteómico (6)

A
  • Fosforilación: en tirosina, serina y treonina.
    Regula la activación o desactivación de la actividad enzimática.
  • Acetilación: Aumenta la estabilidad de proteínas. Regula la interacción proteínas-ADN (como en histonas).
  • Glicosilación: adición de carbohidratos a una proteína. Mejora su solubilidad y estabilidad.
  • Metilación: Regula la transcripción.
  • Acilación: Implica la modificación de lípidos.
    Está asociada a la localización y anclaje en membranas.
  • Ubiquitinación: Marca a las proteínas para su degradación.
19
Q

Western Blot pasos audi*

A

lisis con buffer -> se centrifuga para separa prot
-> hacemos del de acrilamida; permite identificar por peso -> SDS page (gel que se utiliza para analizar prot)
SDS -> detergente para eliminar estructura 2° de prot (se abre la prot; ver tamaño y estructura)
prot separada por tamaño - aislo prot, cuál está PO-4; transfiero a una membrana, con papel filtro, le añado solución con un Ac
-> Ac detecta si está o no fosforilado pues es mod. postraducciones (WB analiza prot)
-> buscamos mod. postraduccionales
-> mi Ac tiene un anti-Ac marcado con fluoroforo radioactivo
-> si hay fosforilación se pega Ac y habrá radioactividad; si no el Ac no se pega

20
Q

Western Blot qué es

A

Es una técnica de detección de proteínas.
-> tmbn identifica mod. postraduccionales

21
Q

Proceso de Western Blot

A
  • Las proteínas se separan por medio de electroforesis en gel.
  • Posteriormente, se transfieren a una membrana.
  • La membrana es expuesta a un anticuerpo específico.
  • La unión entre el anticuerpo y la proteína de interés se detecta utilizando un marcador radioactivo
22
Q

Objetivo principal de la proteómica

A

Identificación de proteínas y función

23
Q

¿Qué es la proteómica subcelular?

A

Estudio de proteínas a nivel de los organelos
-> análisis de proteínas en organelos
¿Qué prot comparto en la mitocondria y en AG, son iguales, funcionan igual, misma cantidad?

24
Q

Es el estudio de las proteínas a nivel de los organelos

A

Proteómica subcelular

25
Q

¿Cómo se detecta el proteoma subcelular?
Inmunofluorescencia

A

Ac
(hacia proteínas subcelulares)
Secuencia nucleotídica: con primers/oligos

26
Q

¿Cómo se detecta el proteoma subcelular?
Fraccionamiento bioquímico

A

Fraccionar cx bioquímicamente (detergentes específicos)

27
Q

¿Cómo se detecta el proteoma subcelular?
Etiquetado por proximidad

A

Etiquetado con biotina

28
Q

Define biomarcadores

A

Marcadores que se pueden utilizar en medicina para la detección precoz, el diagnóstico, la estadificación o el pronóstico de enfermedades

29
Q

¿Qué factores se pueden usar como marcadores?

A

Metabolitos
Péptidos, proteínas
Medidas de propiedades físicas

30
Q

Se aceleró enormemente con el desarrollo de las tecnologías ómicas

A

El descubrimiento de biomarcadores

31
Q

Los biomarcadores pueden proceder del ⎽⎽⎽⎽ o reflejar la reacción del ⎽⎽⎽⎽ frente a la ⎽⎽⎽⎽

A

Propio proceso biológico
Cuerpo
Enfermedad

32
Q

¿Dónde se pueden encontrar los biomarcadores dentro del cuerpo humano?

A

Líquidos biológicos y tejidos (orina, plasma, saliva, líquido intersticial, aspirados de mama, LCR)

S.3 Genho&Protheo (18 decks)

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