F9 + F10 Flashcards
Replication, repair & recombination
Hvad er DNA polymerase
et enzym
Promoverer dannelsen af phosphordiester bindinger, som sætter sig på enheder af DNA backbone Er en template directed enzym, påsætter komplimentær baser til template. Skal bruge en primer for at begynde syntese Elongering foregår i 5´ 3´retning
Der findes DNA-polymerase I og DNA-polymerase II
Polymerasen katalysere denne reaktion:
(DNA)n +dNTP⇌(DNA)(n+1) +PPi
Dette er en reaktion, hvor der sættes en deoxyribonucleotid op en DNA streng.
DNAn: DNA strengen
dTNP: deoxyribonucleotid
PPi: pyrophosphate ione
DNA polymerase kan lave fejl.
DNA proofreading:
ved forkert basepar, vil baserne ikke pares med template.
ved forkert indsatte baser vil den nye streng oftest bliver fjernet
Ved fejl i base, kan der ikke laves hydrogenbindinger, bliver ustabil. Der mangler Watson-Crick base par. Svinger ind i exonukleasesite, da det ikke holdes fast nok i polymerase aktive site. Der klippes det forkerte fra.
i hvilken retning foregår elongering?
- Elongering foregår i 5´ 3´retning
hvad skal DNA polymerase bruge for at kunne syntisere?
en primer
Hvad sker der, hvis der sker fejl i DNA-replikation?
der sker proofreading
1. ved forkert basepar, vil baserne ikke pares med template.
2. ved forkert indsatte baser vil den nye streng oftest bliver fjernet
Ved fejl i base, kan der ikke laves hydrogenbindinger, bliver ustabil. Der mangler Watson-Crick base par. Svinger ind i exonukleasesite, da det ikke holdes fast nok i polymerase aktive site. Der klippes det forkerte fra.
hvad er DNA syntese?
danne DNA strenge ud fra parental DNA strenge
Har følgende karakteristika
1. reaktionen kræver, at alle 4 aktiverede forløber
2. den nye DNA-streng samles direkte op den eksisterende DNA template
dvs. DNA-polymerase katalyserer kun formation af phosphordiester bindinger effektivt, hvis basen på den kommende nukcleoside triphosphate er komplementær til basen på template strengen.
Derved er DNA-polymerase template-directed enzym. Den syntiserer et produkt med en basesekvens, der en komplementær til basesekvensen på template strengen.
3. DNA-polymease kræver en primer for at kunne syntisere
En primerstreng med en fri 3´-OH ende skal være bundet til template strengen inden.
Der laves et nucleophilik angreb af -OH enden på den inderste phosphor atom i deoxyribonucleosid triphosphate.
Derved dannes en phosphodiester binding og pyrophosphate frigives.
Forlængelse af DNA-streng følger 5´til 3´retningen.
- mange DNA-polymerase kan korrigere fejl i DNA ved at fjerne nucleotider, som er forkerte sat sammen
dette gøres ved en separat reaktion
hvad er en template?
er skabelon for dannelse af komplementær
En sekvens af nucleid syre, som bestemmer sekvensen af komplementære nuclein syre i dette tilfælde
I hvilken form/struktur ses DNA oftest?
Det mest forekommende DNA molekyler er
- negativt supercoiled
dette er for at DNA klar til separation af DNA strenge som ved replication.
Dog skal de fjernes, hvorved DNA kan slappe af og rulles ud af helixen.
Dette gøres af topoisomerase enzymere
hvad er helicase?
enzym
Helicase er et enzym, der hjælper med at afvikle dobbeltstrenget DNA ved at bryde hydrogenbindingerne mellem de komplementære baser. Dette gør det muligt for andre enzymer at kopiere eller transskribere DNA’et.
Funktioner:
1. DNA-replikation: Helicase afvikler DNA’et, så det kan kopieres.
2. DNA-reparation: Den hjælper med at reparere beskadiget DNA.
3. Transskription: Helicase åbner DNA’et for, at RNA-polymerase kan lave RNA.
Helicase kræver energi fra ATP for at udføre sit arbejde.
Hvad er topoisomerase?
Enzym som
Får DNA til at ”slappe af og rulles ud af helixen.
Dette skal gøres før replikation.
DNA er naturligt negativt supercoiled
Dette forbereder DNA på processer, hvor DNA strenge skal skilles ad. (replikation). Dog skal denne struktur fjernes, før replikation kan finde sted.
Dette enzym udfolder helixen, ved at midlertidigt kløve DNA.
hvad er forskellen på helicase og topoisomerase?
Helicase og topoisomerase er begge enzymer, der arbejder med DNA, men de udfører forskellige funktioner under processer som DNA-replikation og transskription.
- Helicase:
Funktion: Helicase afvikler (unwinder) DNA-strengen ved at bryde de hydrogenbindinger mellem de komplementære baser i dobbeltstrenget DNA.
Formål: Den skaber to enkeltstrengede DNA-strenge, som bruges som skabeloner til DNA-replikation eller transskription. - Topoisomerase:
Funktion: Topoisomerase løser op for torsion eller supercoiling, der opstår, når DNA-strengen bliver viklet op under afviklingen af helicase. Den gør dette ved at skære og derefter forbinde DNA-strengene igen for at reducere stressen i strukturen.
Formål: Forhindrer, at DNA’et bliver for meget snoet eller knækket under processer som replikation og transskription.
Kort opsummering:
Helicase åbner DNA-strengen.
Topoisomerase lindrer stress og undgår, at DNA-strengen bliver for snoet
hvad kan exonuclease
Enzym (exo = fjerner)
Fjerner forkerte nukleotidbaser
Gør det fra 3´enden ved hydrolyse.
Ved forkert nukleotidbase vil hydrogenbindingerne være svagere og kan ikke holdes fast i polymerase aktiv site.
Fjerner også RNA primer
Exonuklease: enzym fjerner(hydrolysere) nukleotider
Hvad betyder Origin of replication
Origin of replication (oriC locus)
Grundlaget for replikation
Startstedet for DNA replikation i E. coli.
På 245-bp region.
Startstedet indeholder 4 kopier af samme sekvens
Dette sted starter DNA replikationskomplekset
Resultatet er prepriming kompleks, som et andet enzym kan danne et komplimentær DNA streng til.
Indeholder 4 kopier af sekvenser, som er oftest brugte bindings site for origin-recognition protein DnaA.
hvad er primase?
Primase(RNA polymerase) laver processen priming
- DNA polymerase kan ikke starte replikation ved de novo strand, der skal en primer til
- En RNA polymerase (primase) påsættes på prepriming
- Primase syntisere derved kort RNA sekevsens (som er komplimentær)
- Exonuclease fjerne RNA primer
RNA syntese kræves for at kunne starte DNA syntese.
En specialiseret RNA-polymerase kaldet Primase kommer til prepriming komplekset : dette kaldes primosome (samlingen)
Primase syntisere en kort RNA streng (10 nukleotider) som er komplementære til template-DNA strengen
Dvs. der skabes en RNA primer, som er starten på DNA syntesen
hvor ses replikation fork?
Stedet for DNA syntese
Pga. af den kompleks, som dannes ved syntisere nye DNA-strenge.
De to strenge er antiparallele hvorved de går i modsatte retning.
Dog syntiseres DNA kun fra 5´-3´retningen gælder både lagging og leading strand (vigtigt at huske)
Hvad kan DNA-ligase?
DNA-polymerase syntisere leading strand
DNA-ligase sammensætter Okazaki fragementer til lagging strand.
Ved forsættelse af DNA syntese, skal fragmenterne kovalent bindes sammen ved hjælp af DNA ligase.
DNA ligase
- et enzym
- bruger ATP hydrolyse til at binde nye DNA strenge sammen.