Diagnostic parasito du paludisme

Question 1

Diagnostic de sérologie indirecte

Answer 1

Principe: immunofluorescence, ELISA
Indications : diagnostique rétrospectif du paludisme, prévention du paludisme transfusionnelle, étude épidémiologique, paludisme viscérale évolutif

Ne constitue en aucun cas un diagnostic d’urgence de l’accès palustre

Question 2

Frottis mince sanguin

Answer 2

Principe :
Peu coûteux
* Personnel entraîné
* 20 min (100 champs)
* Indispensable pour le diagnostic d’espèces
* Adaptation du ttt

→ Fixation du sang à l’alcool et coloration MGG ou Giemsa
→ Observation de 200 champs microscopique minimum et visualisation de parasites intra érythrocytaires
→ Grossissement x 100

Avantages :
Identification de l’espèce
Estimation de la parasitémie : % d’hématies parasitées par les formes asexuées

Inconvénients :
Sensibilité inférieur à la goutte épaisse : seuil (minimal) de 100-150 parasites/yL

Pour F. falciparum :
Frottis monotone (=1 seule type de
forme)
→ Jeunes trophozoïtes svt très petits
(forme marginale, forme en bague à
chaton), souvent plusieurs trophozoïtes
→ et/ou Gamétocytes falciformes (forme en banane, croissant)
Pigment rassemblé autour du noyau
* Schizontes observés dans rate et moelle osseuse
* GR parasité : taille peu modifiée,
coloration + pâle, taches de Maurer

Question 3

Goutte épaisse

Answer 3

Méthode de référence
Technique de micro-concentration:
Prélèvement de quelques yL de sang
lyse des hématies puis coloration MGG
* Personnel entraîné
* meilleure sensibilité (x10)
* Nbre de parasite/200 leucocytes
Observation des parasites libre

Avantages:
Bonne sensibilité : seuil de 10-20 parasites/yL
Estimation du nombre de parasites pour 1000 leucocytes

Inconvénients:
Diagnostic d’espèce difficile
Temps de réalisation potentiellement long

Question 4

Quantitative Buffy Coat

Answer 4

Principe :
Techniques de concentration après centrifugation
Marquage des noyaux du parasite à l’acridine orange, agents intercalants des acides nucléiques
→ Observation au microscope à fluorescence

Avantage :
Bonne sensibilité : seuil de 10-20 parasites/yL
Lecture facile lié au marquage fluorescent

Inconvénients :
Absence de diagnostic d’espèce
Absence d’estimation de la parasitémie
Technique onéreuse, appareillage spécifique

Question 5

Biologie moléculaire : technique LAMP

Answer 5

Principe :
Amplification isothermes de l’ADN facilitée par boucle

Avantage :
- Sensibilité excellente : seuil ≥ 1 parasite/yL
- Spécificité excellente
- Technique très rapide (45min)
- Très bonne technique d’exclusion (VPN élevé)

Inconvénients :
- Absence de quantification et de diagnostique d’espèces
- Persistance de l’ADN parasitaire après traitement : technique non adapté au suivi

Question 6

Biologie moléculaire : PCR spécifique d’espèces

Answer 6

Principe:
PCR en temps réel

Avantage :
- Confirmation de l’espèce en 1 ou 2 étapes
- Détection des faux négatifs
- Excellente sensibilité

Inconvénients
- Non adapté à l’urgence
- Techniques de recours et d’expertise

Question 7

Test de diagnostic rapide (TDR)

Answer 7

Principe :
- Détection immuno-chromatographique d’antigène circulant du parasite
- Antigène pan-plasmodiaux: pLDH, aldolase
Protéines spécifiques Pf : HRP2, PfLDH
Protéines spécifiquesPv: PvLDH

Avantages :
Rapide et simplicité d’exécution

Inconvénients :
Absence de quantification
Risque de faux positifs et de faux négatifs
Sensibilité moindre : 100 parasites/yL
Simple orientations d’espèces