הרצאה 9 Flashcards
איך ניתן לראות נוגדנים פלורסנטיים שנקשרים לתא המטרה?
למה עושים את זה?
באמצעות נוגדנים. אם נרצה לראות את ההתקשרות, נרצה לחבר לנוגדן דטרמיננטה, מולקולה נוספת, דרכה נוכל לראות את ההתחברות הזו. זה יכול להיות אנזים שמבצע ריאקציה אנזימתית שפולטת צבע, זה יכול להיות משהו רדיואקטיבי, וזה יכול להיות גם מולקולה פלורסנטית. על מולקולות אלו, כשמקרינים אור באורך גל מסוים, היא זורחת ונותנת עוצמה של פלורסנציה.
למה עושים את זה? (מה מרוויחים באמצעות זה?)
- ויזואליזציה של תאים ברקמה.
- הפרדת אוכלוסיית תאים ספציפית מתערובת תאים.
- חלוקה התמיינות ונדידה של תאים.
- זיהוי חלבונים ציטופלסמתיים.
FAX מהו המכשיר?
מכשיר שעושה אנליזה לתאים: מפריד בין תאים ונותן ערכים כמותיים. הרעיון הוא שמתחילים עם אוכלוסייה מעורבת של תאים, כמו תאים ממח העצם, ועושים זיהוי של התאים בעזרת בנוגדנים מונו-קלונליים, שמכירים חלבונים ספציפיים.
התא עובר -> פוגעת בו אלומת לייזר -> בסופו של דבר התא מקבל ערך מספרי, שמבטא את עוצמת הפלורסנציה שלו.
מה רואים בתמונה?
FAX בדיקת
הפרדה עבור יותר מנוגדן אחד: במצב הזה, בכל תא פוגעות שתי אלומות, גם עבור החומר השני, ואז מקבל עוד מספר. כלומר, כל תא מקבל שני מספרים: עבור פלורסנציה אדומה ועבור פלורסנציה צהובה. עכשו ישנה אותה טבלת נתונים, ממנה מפיקים היסטוגרמה עבור שני הצבעים. לגובה הפיק אין משמעות.
נרצה לייצר אנליזה דו-ממדית. נבדוק עוצמת פלורסנציה של צבע אחד צהוב על ציר איקס ושל צבע שני אדום על ציר וואי.
רבע 1 (-,-): לא נבצעו באף נוגדן. כמו התאים הירוקים.
רבע 2 (-,+): נצבעו רק בנוגדן צהוב. כמו התאים הכחולים.
רבע 3 (+,-): נצבעו רק בנוגדן אדום. כמו תא אדום אחד.
רבע 4 (+,+): נצבעו בשני הנוגדנים צהוב ואדום. כמו התא האדום השני.
במציאות, המכשירים הרבה יותר מתוחכמים, המולקולות הפלורסנציות הן מאוד מדויקות, וניתן להפריד תאים עם 18 מולקולות פלורסנטיות שונות.
מהם השלבים של התפתחות תאי בי?
מה קורה בכל אחד מהם?
B מה תאי הסטרומה מספקים לתאי ה
המתפתחים במח העצם?
B במה הם מגבילים את תאי ה?
הם מספקים מגע- אינטראקציה בין הרצפטור לליגאנד, וגם גורם
IL-7 גדילה (אינטרלוקין 7)- קרי
התאים הראשונים, תלויים בשני הפקטורים. ככל שהתא מתקדם בתהליך ההתפתחות הוא הופך להיות פחות תלוי במגע ובגורם הגדילה.
כאשר התא עובר דיפרנציאציה, הוא מוגבל בזמן. כל הזמן נוצרים תאים חדשים, ותא שמגיע אחריו דוחף אותו. דחיפה מרחיקה את התא משני הפקטורים, ותוך כדי הדחיפה צריכה להיות הצלחה של תהליך הרקומבינציה כדי לאפשר לו להתמיין הלאה. אם הוא נדחף ולא מצליח לעשות רקומבינציה נכונה- התא לא ישרוד, כי הוא מתרחק מהגורמים הקריטיים עבור ההישרדות שלו, ואז הוא ימות.
מה משמעות הגרפים האלו?
Igα ו Igβ מהם?
חלק מקומפלקס ממברנלי שנמצא עם רצפטור לאנטיגן.
ההטרודימר של. אייגיאלפא ואייגיביתא הוא זה שאחראי על העברת הסיגנלים מהרצפטור לתוך התא.
כלומר, אם הרצפטור מתבטא וקושר אנטיגן, הסיגנל צריך לעבור בתוך התא, ומי שאחראי על כך זה ההטרו-דימר.
allelic exclusion איך נעשה ה
ברמת הפקטורים?
DNA נקשר אל ה FOXO פקטור השעתוק
RAG1 RAG2 ומאפשר ביטוי של.
באמצעותם התא עושה רקומבינציה.
כשהתא ממבטא את הרצפטור, הביטוי מאפשר מעבר של סיגנל
PIK3 שעובר במסלול של.
ושולח אותו לדגרגציה FOXO הוא גורם לפוספורילציה של
DNA ובכך מבטל את הקישור ל
והרקומבינציה נעצרת RAG1,2 יש עצירה של הביטוי של
מערכת כזו מבקרת את עצמה, ושולטת על הרעיון שיהיה רק רצפטור אחד שלא יוחלף, וכל שלא יהיה ביטוי של רצפטורים נוספים. תא אחד עם ספציפיות אחת. הדבר הבא שהתא צריך לעשות, זה לראות מה קורה כאשר הרצפטור נבחן לספציפיות שלו. אז עולה השאלה האם הרצפטור קושר אנטיגן או לא.
קושר אנטיגן במח העצם B מה קורה אם תא ?
מה קורה אם הוא קושר אנטיגן בפריפריה?
במח עצם- אין אנטיגנים זרים, ולכן המשמעות של קשירת אנטיגן לרצפטור היא שהרצפטור קשר אנטיגן עצמי. זה אומר שהתא מבטא רצפטור עצמי- תא מסוכן וצריך לטפל בו=נרצה ריסון וסינון.
בפריפריה, תא בי בוגר- במקרה הזה קשירת אנטיגן בפריפריה תהיה לרוב לאנטיגן זר, והתוצאה של קישור זה היא תגובה חיסונית.
מה קורה לאחר קישור האנטיגן אל הרצפטור?
נוצרים שני מרכיבים:
- IP3 - מאפשר זרם קלציום
- DAG- PKC מפעיל את
כששני המרכיבים פועלים יחדיו, ישנה הפעלה של התא, יש סינתזה של חומצות גרעין, והתא נכנס לתהליך של חלוקה.
כדי שההפעלה ע”י האנטיגן תהיה אפקטיבית חשוב שיהיה קרוס לינקינג של שני רצפטורים על פני התא עם אנטיגן, המטרה היא לנסות לצמד אותם אחד לשני, וכך ניתן יהיה לייצר תגובה אפקטיבית יותר. כלומר תא יכול להתקשר לשני אזורים שונים על גבי אותו חיידק, וכך לעשות קרוס לינקינג של הרצפטורים.
CO RECEPTORS מהם ה?
מולקולות נוספות על פני התא שמהוות מולקולות עזר לרצפטור. הן מסייעות לכך שהסף הנדרש להפעלה של התא יהיה גבוה יותר או נמוך יותר. למשל:
CD45, CD19- מורידות את הסף.
positive regulators
צריך גירוי חלש יותר כדי שהתא יופעל.
syc, CD22- מעלות את הסף.
צריך גירוי חזק יותר כדי שהתא יופעל.
negative regulators
אלו והקרוס לינקין משפיעים על שיקולי התא להפעלה עצמית.
mature לתא immature מה ההבדל בין הפעלת תא
B בתאי
central tolerance מהו ה?
איך הוא מתרחש?
התמודדות עם תא שמזהה אנטיגן עצמי (מסוכן).
שלוש דרכים עיקריות:
- Clonal deletion- התא או הקלון עובר אפופטוזיס
- Clonal Anergy- התא או הקלון עוברים שיתוק.
לא ברור מה ההיגיון הפיסיולוגי, תאים קצרי חיים, לא יעברו אקטיבציה.
- Secondary Rearrangements- רקומבינציה שניה.
frameshift בדומה למקרה בו יש.
נכנסת לפעולה VDJ recombinase מערכת ה
ומחליפה את הרקומבינציה המקודדת לרצפטור אנטי-עצמי ברצפטור חדש עם ספציפיות חדשה, שבתקווה יהיה תקין ולא אנטי עצמי. כזכור- רקומבינציה שנייה מתרחשת רק בשרשרת הקלה.
מהם תהליכי הסבילות החיסונית?
חיסול/ מיתון תאי מערכת החיסון שמזהים תאים עצמיים כלא עצמיים.
- Central Tolerance- מתרחש באיבר חיסוני כמו מח העצם. המנגנון המרכזי לשמירה על רפרטואר בטוח.
- peripheral tolerance- מתרחש בפריפריה.
מטרתו לכסות על תאים שכן הצליחו לצאת ממח העצם, או שעברו תהליך שגרם להם להיות מסוכנים לגוף בפריפריה.
מהי ההוכחה לקיום המנגנונים של סבילות חיסונית?
העובדה שיש אנשים עם מחלות אוטו-אימוניות מעידה שנוצרים רצפטורים אנטי-עצמיים, אבל העובדה שרוב האוכלוסייה לא מפתחת מחלות אוטו-אימוניות מעידה שהרצפטורים האנטי-עצמיים מטופלים.
