8 Electroforesis De Proteínas Flashcards
¿Para qué sirve la electroforesis?
Para la analizar moléculas complejas de interés biológico; se utiliza para su detección, control de pureza y cuantificación.
¿Qué es la PAGE?
Electroforesis en gel de poliacrilamida.
Técnica empleada para separar moléculas en base a su peso molecular o punto isoeléctrico.
¿Las proteínas tiene una carga y tamaño definido?
Nel, a diferencia del DNA, las prots no tienen una carga definida y su estructura varía de acuerdo al tipo de proteína, en función de la composición y cantidad de aa que las componen.
¿Qué se hace primero para separar las proteínas en base a su tamaño?
Primero es necesario desnaturalizar la molécula para eliminar sus conformaciones secundaria, terciaria o cuaternaria, y además, es preciso homogeneizar su carga
eléctrica.
¿Qué se utiliza para desnaturalizar las proteínas y homogeneizar su carga?
Se emplea un detergente, como el dodecilsulfato sódico (SDS), que desnaturaliza las proteínas al eliminar plegamientos entre sus aminoácidos y
también rodea a las moléculas proteicas con una carga negativa
¿Qué se usa para asegurar una completa desnaturalización de las proteínas?
Se emplea el compuesto β-mercaptoetanol como parte del buffer de carga; este compuesto rompe los puentes disulfuro en las proteínas
¿Cuánto SDS se une a una prot? ¿Qué se logra con esto?
La cantidad de SDS que se une a la proteína es directamente proporcional a su tamaño; así se logra que todas las proteínas tengan una carga total negativa.
¿Para qué sirve la desnaturalización de las proteínas en la electroforesis?
La desnaturalización de las proteínas hace que su velocidad de migración sea una función directa de
su tamaño y no de su estructura
¿Cómo se mueven las prots después del tratamiento?
Las proteínas van a migrar hacia el polo positivo y cuando finalice la
electroforesis, las moléculas más pequeñas habrán migrado mucho más que las grandes
¿Cómo se observan las bandas de las proteínas separadas?
Se pueden observar mediante la adición de colorantes específicos
como Azul de Coomassie o soluciones de nitrato de plata
¿Qué se hace para determinar el peso molecular de las proteínas?
Junto a las muestras, se corre un estándar de tamaño que consta de fragmentos de proteínas de tamaño conocido
Unidad de tamaño para las moléculas proteicas
Kilo Dalton (kDa)
