5 Transformación de Bacterias

Question 1

¿Qué son los plásmidos?

Answer 1

Moléculas de ADN extracromosómico circular y de doble cadena

Question 2

¿Los plásmidos forman parte del cromosoma bacteriano?

Answer 2

No, son moléculas aparte del cromosoma bacteriano

Question 3

¿El ADN plasmídico está relacionado en la transcripción del ADN nuclear?

Answer 3

No, un plásmido se transcribe y se replica de manera independiente al ADN nuclear

Question 4

¿Qué significa que un plásmido pueda ser de bajo número o alto número de copia?

Answer 4

Que pueden haber pocos o varios plásmidos del mismo tipo en cada célula

Question 5

¿Las bacterias tienen plásmidos naturalmente y para qué les servirían?

Answer 5

Sí, muchos de estos contienen genes que les otorgan resistencia a antibióticos y/o que codifican para factores de virulencia, como toxinas

Question 6

¿Para qué se usan los plásmidos en la creación de ADN recombinante?

Answer 6

Se generan plásmidos que contienen sitios de restricción para diferentes enzimas (sitio de clonación múltiple)

Question 7

¿Cómo se forma un plásmido recombinante?

Answer 7

1-Se corta el ADN con enzimas de restricción que poseen las secuencias de corte en el sitio de clonación múltiple de del plásmido
2-El ADN se puede insertar dentro del plásmido

Question 8

Proceso de transformación (en el contexto con bacterias)

Answer 8

A través de este proceso, se introduce un plásmido en una bacteria (generando bacterias modificadas que contiene ADN de otra fuente)

Question 9

¿El ADN de los plásmidos irrumpe con la expresión de genes bacterianos?

Answer 9

No, el ADN exógeno puede expresarse en una bacteria, a la vez que se expresan otros genes bacterianos

Question 10

¿Para qué sirve expresar ADN exógeno en una bacteria?

Answer 10

Puede servir para estudiar las propiedades de ese ADN o para obtener el producto de su expresión que puede ser una proteína específicaq

Question 11

Uso de los plásmidos para hacer ¿librerías genómicas?

Answer 11

Yes

Question 12

¿Las bacterias se transfieren plásmidos? ¿Esto les sirve?

Answer 12

Sí, pueden transferirse plásmidos y esto les puede dar nuevas características que les ayuden a adaptarse a nuevos ambientes

Question 13

3 mecanismos de las bacterias para adquirir o intercambiar información genética

Answer 13

Transformación
Transducción
Conjugación bacteriana

Question 14

Transformación bacteriana

Answer 14

Proceso mediante el cual una célula bacteriana capta e incorpora un fragmento de ADN exógeno que puede integrarse o no en su genoma

Question 15

¿El proceso de la transformación es para todas las bacterias?

Answer 15

Se considera un proceso fisiológico para las bacterias que son naturalmente COMPETENTES

Question 16

¿Cuándo se considera que una bacteria es competente?

Answer 16

Cuando tiene la capacidad para captar un fragmento de ADN exógeno

Question 17

¿Todas las bacterias son competentes?

Answer 17

Aprox un 1% de todas las especies bacterianas son competentes de forma natural

Question 18

¿Una bacteria no competente puede hacerse competente?

Answer 18

Sí, se puede inducir el estado de “bacteria competente” de de forma artificial en el laboratorio

Question 19

Para inducir a una bacteria a ser competente se emplean:

Answer 19

Tratamientos químicos, físicos y enzimáticos que hacen que la célula bacteriana sea permeable al ADN exógeno (plásmido)

Question 20

Dos métodos más importantes para inducir la transformación:

Answer 20

Shock térmico

Electroporación

Question 21

Shock térmico

¿Cómo se hace?

Answer 21

Las células bacterianas son incubadas en hielo en presencia de cationes divalentes (Ca2+)
Luego, las células son sometidas a un breve shock térmico (42° por 30-120seg), lo cual permite que el ADN ingrese a las células

Question 22

¿Por qué se incuba a las células bacterianas en hielo con cationes divalentes?

Answer 22

Porque esto permite la atracción del ADN exógeno a la membrana plasmática

Question 23

¿Para qué sirve el shock térmico?

Answer 23

Es ideal para la introducción de plásmidos circulares

Question 24

Electroporación

¿Qué se hace?

Answer 24

Las células bacterianas son sometidas a un pulso eléctrico que genera poros en la membrana celular, a través de los cuales pasan las moléculas de ADN extracelular

Question 25

¿Cómo se utiliza la transformación bacteriana?

Answer 25

Sirve como herramienta en la creación de bacterias transgénicas con usos comerciales o que se pueden emplear como fuente de almacenamiento de las bibliotecas genómicas

Question 26

Escherichia coli DH10B

¿Qué es?

Answer 26

Cepa bacteriana de laboratorio que posee una mutaciones en el gen lacZ del operón de la lactosa y hay una mutación en la enzima L-ribulosa-fosfato-4-epimerasa

Question 27

En Escherichia coli DH10B hay una mutación en el gen lacZ del operón de la lactosa ¿Qué provoca esto?

Answer 27

No produce el péptido alpha que es parte de la beta-galactosidasa, por eso es incapaz de metabolizar la lactosa

Question 28

En Escherichia coli DH10B hay una mutación en la enzima L-ribulosa-fosfato-4-epimerasa
¿Qué provoca esto?

Answer 28

Bloquea el metabolismo de la arabinosa

Question 29

¿Cómo se seleccionan las Escherichia coli DH10B

transformadas exitosamente?

Answer 29

Esta cepa es sensible a diferentes antibióticos, entre ellos a la ampicilina
Esto permite seleccionar a las bacterias transformadas

Question 30

¿Qué es el medio LB?

Answer 30

Es un medio de cultivo selectivo diseñado para el crecimiento de bacterias de la familia Enterobacteriaceae, las cuales son Gram Negativas

Question 31

Si se incluye arabinosa en el medio LB, ¿qué pasa?

Answer 31

La arabinosa
es un azúcar simple que al ser degradado permite la transcripción del gen reportero rfp y esto producirá colonias de color rosado o rojo (Arab+)

Question 32

Si no se añade arabinosa en el medio LB, ¿qué pasa?

Answer 32

En caso de que no haya

arabinosa en el medio, las colonias tendrán una coloración blanca.