6 PCR (manual) Flashcards
¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa?
Técnica que permite amplificar o copiar varias veces un fragmento específico de ADN
Elementos que permiten la PCR (6 cosas)
1-Taq polimerasa 2-MgCl2 3-Primers (iniciadores o cebadores) 4-dNTPs (desoxinucleótidos trifosfato) 5-Solución amortiguadora o buffer 6-DNA molde
Taq polimerasa
¿Qué es y qué tiene de especial?
DNA polimerasa de la bacteria Thermus aquaticus; enzima capaz de replicar el DNA a altas temperaturas.
MgCl2
¿Para qué se usa?
Es el cofactor de la taq polimerasa
Primers
¿Qué son y para qué sirven en la PCR?
Secuencias cortas de DNA que se unen a las regiones complementarias de la cadena molde y señalan el sitio donde empezará la amplificación
Desoxinucleótidos trifosfato o dNTPs
¿Qué son?
Mezcla de los 4 nucleótidos trifosfato (dATP,
dCTP, dGTP y dTTP) usados como sustratos por la polimerasa para sintetizar
la nueva cadena de DNA
¿Qué hace el Buffer?
Brinda las condiciones de pH necesarias para que se lleve a
cabo la reacción de PCR
DNA molde (importante en la PCR)
Contiene la secuencia de DNA que va a ser amplificada o copiada durante la reacción
3 pasos de la PCR
1-Desnaturalización del DNA molde
2-Hibridación o anclaje de los iniciadores
3-Elongación; síntesis de una nueva cadena de DNA
¿Qué ocurre en la desnaturalización del DNA molde? Menciona T°
Se abren las dos hebras de DNA, generalmente a una T° de 90-95°C
¿Qué ocurre en la hibridación o anclaje de los iniciadores? Menciona T°
Los primers se unen en las regiones de las cadenas de DNA molde en la secuencia complementaria; a 45-60°C (+ T° de hibridación -> mayor especificida entre el primer y la secuencia complementaria)
¿Qué ocurre en la elongación de la nueva cadena de DNA? Menciona T°
La enzima polimerasa se añade nucleótidos a partir del 3’OH del primer, de acuerdo a la complementariedad de la cadena molde; 70-72°
Cada ciclo se repite un mínimo de __ y en cada ciclo se obtienen __ nuevas copias de la región de interés
35 veces
2 nuevas copias
(las copias nuevas pueden ser usadas como moldes par nuevos ciclos)
¿Qué es Alu?
Es un transposón clasificado como un SINE que se reproduce copiándose a sí mismo e insertándose en nuevos sitios del genoma
¿Cuánto del genoma es Alu y dónde se inserta?
Human cromosomes tienen aprox 100 mil copias de Alu (10% del total del genoma) . Generaly, sus inserciones ocurren en regiones no codificantes; PERO ciertas inserciones pueden estar ligadas con el desarrollo de ciertas enfermedades.
