4.3 Electroforesis (diapositivas) Flashcards
Pasos para la preparación del gel de agarosa
1- Se arma la cama de electroforesis con el peine
2-Se pesa la agarosa (depend concentración gel)
3-Se mide en una probeta 50ml de TBE 1X
4-Agarosa y el TBE en un frasco
5-Se calienta para disolver la agarosa
6-Se enfría por unos segundos (sin que se solidifique)
7-Se coloca el SYBR safe
8-Se coloca en la cámara y se espera a que se solidifique
9-Se retira el peine: gel listo
Virus bacteriófago
Virus que infecta bacteria que tiene una cápside y dentro está el material genético
Diferencia ciclo lítico y lisogénico
El material genético produce sus proteínas y destruye a la bacteria en el ciclo LÍTICO.
En el LISOGÉNICO se une al ADN de las bacterias para formar el profago.
Enzimas de restricción
Proteínas que realizan cortes en sitios específicos del ADN denominados sitios de restricción
Secuencia de reconocimiento
Secuencia que reconoce la enzima; es palíndroma
Ejemplo: GAATTC
Sitio de restricción
Lugar específico donde la enzima realiza el corte
Ejemplo: G / AATTC
¿Las enzimas de restricción son palíndromas?
Sí, no te olvides
¿Qué pedazos de ADN llegan más lejos en la matriz porosa?
Las moléculas grandes se quedan arriba y las moléculas pequeñas bajan
¿La agarosa se diluye a la temperatura ambiente?
No, es necesario subir la temperatura
Reactivo SYBR safe
¿Para qué sirve?
El reactivo se intercala con la molécula de ADN y permite verlo porque emite fluorescencia
¿Cómo se carga el gel de agarosa?
Se agrega buffer de carga a cada muestra para que el ADN caiga en los pocillos
¿Cómo se reconoce el tamaño de las bandas?
Se carga un ladder o escalera de ADN que tiene fragmentos con pesos conocidos
¿Para qué se carga el Ladder?
Para tener una referencia de los tamaños del ADN
