4.2 Electroforesis en gel de Agarosa (manual 2) Flashcards
¿Qué es la electroforesis?
Técnica utilizada para la separación de biomoléculas (como el ADN) según su tamaño y carga eléctrica
¿Cómo se separan las biomoléculas?
A través de una matriz porosa (como el gel de agarosa) que se encuentra bajo la influencia de un campo eléctrico
¿Qué es la agarosa?
Es un polisacárido extraído de determinadas especies de algas marinas
Propiedades de la agarosa:
-Solubilidad
-Soluble en agua a T° entre 50 y 60°C
Propiedades agarosa:
-Matriz
-Al enfriarse forma una matriz porosa como un gel que puede usarse como un tamiz para separar ácidos nucléicos
Ventaja de la agarosa
El tamaño de poros del gel es inversamente proporcional a la concentración de agarosa; esto permite manipular el tamaño de los poros para separa moléculas de distintos tamaños
¿Cómo se expresa la concentración de agarosa en un gel?
Generalmente, se expresa como el % de agarosa en el volumen total de la solución
En la matriz de agarosa es posible correr ADN, ¿pero cómo se lo separa de otras moléculas?
La carga negativa del ADN permite que se desplace bajo la influencia de un campo eléctrico en dirección al polo positivo
Explique cómo funciona la matriz de agarosa para separa ADN
Las moléculas de mayor tamaño se mueven con dificultad a través de los poros de gel, entonces se quedan en la parte superior
Las moléculas más pequeñas traviesan los poros, pero se quedan en la parte inferior
La electroforesis se lleva a cabo en un aparato llamado:
Cámara de electroforesis
¿Cómo se utiliza la cámara de electroforesis?
La cámara se llena con una solución buffer (TBE 1X) que permite la conducción de electricidad
La matriz porosa se sumerge dentro del buffer
La unidad del tamaño de una molécula de ácidos nucleicos son los:
Pares de bases, los que representan un par de nucleótidos
Para estimar el tamaño de una molécula de ADN con electroforesis en gel de agarosa, se debe:
Incluir en la migración una escalera de ADN, la cual está conformada por fragmentos de ADN de tamaño conocido
¿Qué se necesita para ver el ADN en gel de agarosa?
Es necesario usar agentes que se intercalan entre los nucleótidos y que fluorescen al ser expuestos a la luz UV
¿Qué agente se usa para inducir la fluorescencia?
SYBR Dafe, que tiene una reducida capacidad mutagénica (en comparación al Br de etidio)
Igual debe manejarse con cuidado
