5.2 Transform bact - Diapositivas Flashcards
¿Un plásmido es más grande o más pequeño que el ADN genómico?
Un plásmido tiene un tamaño mucho menor que el ADN genómico (1 a 250kb)
¿Qué tipo de genes se pueden traspasar en un plásmido de una bacteria a otra? (3)
Genes de resistencia (antibióticos), de virulencia (toxinas), para degradar compuestos extraños
Usos de los plásmidos (4)
- Expresión de proteínas de distinto origen en bacterias
- Análisis de secuencias
- Librerías genómicas
- Transformación de org más complejos (plant y anim)
Librería genómica
¿Qué es?
Antes se cortaba el genoma por partes; esas partes se metían en plásmidos; esos plásmidos se metían en bacterias
EJ: En una colección de bacterias tenían el genoma de una planta
¿Transformar bacterias y hacer plásmidos recombinantes es 100% eficiente?
No, el plásmido no siempre se une con el ADN de interés
Cuando se corta el ADN de interés y el plásmido pueden pasar 3 cosas:
1-El plásmido se vuelve a cerrar
2-Se crea el plásmido recombinante
3-La cadena lineal se vuelve a cerrar
¿El proceso de transformación es siempre eficiente?
No, no todas las bacterias absorben el plásmido y algunas bacterias se mueren
Formas para crear variación fenotípica en bacterias
Transducción
Transformación
Conjugación bacteriana
Transducción
What is it?
Un virus, que sale de una bacteria, generalmente se lleva un poco de información de la bacteria y eso se lo pasa a otra bacteria
Conjugación
What is it?
La información genética pasa por un pili entre dos bacterias
Transformación
What is it?
Se generan poros en la membrana por los que entra el material genético que está en el entorno
¿Es común la transformación?
No es común jeje pasa en menos del 1% de las bacterias
Competencia bateriana
What is it?
Capacidad de captar ADN exógeno
Hay bacterias que tienen naturalmente esta capacidad (poquitas)
Maneras artificiales para inducir la competencia y transformación en el laboratorio (2)
Electroporación
Shock térmico
Electroporación
¿Qué se hace?
Un cultivo bacteriano se somete a pulsos eléctricos
baja eficiencia porque se mueren un montón de bacterias
Shock térmico
¿Qué se hace?
Se tiene las bacterias en frío y luego sube la temperatura a 42° para generar poros
Se usa Cl2Ca en el shock térmico para…
Atraer al ADN a la membrana celular; estos dos tienen carga negativa, entonces los iones de Ca2+ se evade el choque entre cargas y el plásmido se acerva a la membrana
¿Qué hace el gen Ori en el plásmido pARA?
Origen de replicación
Hace que el plásmido siga replicándose dentro de la célula
¿Qué hace la proteína araC en el plásmido pARA?
Regula la expresión del rfp
¿Qué hace el gen pBAD en el plásmido pARA?
Promotor del rfp; en pBAD se une lapolimerasa
¿Qué hace el gen rfp en el plásmido pARA?
Codifica la red fluorescent protein
¿Qué hace el gen ampR en el plásmido pARA?
Es un gen de resistencia a la ampicilina
¿Cómo se inhibe la transcripción de rfp con araC?
La proteína araC normalmente impide que rfp se transcriba porque se une al promotor
Si hay arabinosa, la araC se una a la arabinosa y no se une con promotor, entonces la polimerasa transcribe rfp
