5.2 Transform bact - Diapositivas Flashcards

1
Q

¿Un plásmido es más grande o más pequeño que el ADN genómico?

A

Un plásmido tiene un tamaño mucho menor que el ADN genómico (1 a 250kb)

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2
Q

¿Qué tipo de genes se pueden traspasar en un plásmido de una bacteria a otra? (3)

A

Genes de resistencia (antibióticos), de virulencia (toxinas), para degradar compuestos extraños

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3
Q

Usos de los plásmidos (4)

A
  • Expresión de proteínas de distinto origen en bacterias
  • Análisis de secuencias
  • Librerías genómicas
  • Transformación de org más complejos (plant y anim)
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4
Q

Librería genómica

¿Qué es?

A

Antes se cortaba el genoma por partes; esas partes se metían en plásmidos; esos plásmidos se metían en bacterias
EJ: En una colección de bacterias tenían el genoma de una planta

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5
Q

¿Transformar bacterias y hacer plásmidos recombinantes es 100% eficiente?

A

No, el plásmido no siempre se une con el ADN de interés

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6
Q

Cuando se corta el ADN de interés y el plásmido pueden pasar 3 cosas:

A

1-El plásmido se vuelve a cerrar
2-Se crea el plásmido recombinante
3-La cadena lineal se vuelve a cerrar

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7
Q

¿El proceso de transformación es siempre eficiente?

A

No, no todas las bacterias absorben el plásmido y algunas bacterias se mueren

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8
Q

Formas para crear variación fenotípica en bacterias

A

Transducción
Transformación
Conjugación bacteriana

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9
Q

Transducción

What is it?

A

Un virus, que sale de una bacteria, generalmente se lleva un poco de información de la bacteria y eso se lo pasa a otra bacteria

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10
Q

Conjugación

What is it?

A

La información genética pasa por un pili entre dos bacterias

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11
Q

Transformación

What is it?

A

Se generan poros en la membrana por los que entra el material genético que está en el entorno

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12
Q

¿Es común la transformación?

A

No es común jeje pasa en menos del 1% de las bacterias

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13
Q

Competencia bateriana

What is it?

A

Capacidad de captar ADN exógeno

Hay bacterias que tienen naturalmente esta capacidad (poquitas)

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14
Q

Maneras artificiales para inducir la competencia y transformación en el laboratorio (2)

A

Electroporación

Shock térmico

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15
Q

Electroporación

¿Qué se hace?

A

Un cultivo bacteriano se somete a pulsos eléctricos

baja eficiencia porque se mueren un montón de bacterias

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16
Q

Shock térmico

¿Qué se hace?

A

Se tiene las bacterias en frío y luego sube la temperatura a 42° para generar poros

17
Q

Se usa Cl2Ca en el shock térmico para…

A

Atraer al ADN a la membrana celular; estos dos tienen carga negativa, entonces los iones de Ca2+ se evade el choque entre cargas y el plásmido se acerva a la membrana

18
Q

¿Qué hace el gen Ori en el plásmido pARA?

A

Origen de replicación

Hace que el plásmido siga replicándose dentro de la célula

19
Q

¿Qué hace la proteína araC en el plásmido pARA?

A

Regula la expresión del rfp

20
Q

¿Qué hace el gen pBAD en el plásmido pARA?

A

Promotor del rfp; en pBAD se une lapolimerasa

21
Q

¿Qué hace el gen rfp en el plásmido pARA?

A

Codifica la red fluorescent protein

22
Q

¿Qué hace el gen ampR en el plásmido pARA?

A

Es un gen de resistencia a la ampicilina

23
Q

¿Cómo se inhibe la transcripción de rfp con araC?

A

La proteína araC normalmente impide que rfp se transcriba porque se une al promotor
Si hay arabinosa, la araC se una a la arabinosa y no se une con promotor, entonces la polimerasa transcribe rfp