3 Extracción de ADN (manual) Flashcards
Pasos de la extracción del ADN (5)
1- Lisis 2- Precipitación 3- Lavado 4- Resuspensión 5- Determinación de la calidad y concentración
¿Qué ocurre en la lisis?
Se rompen las membranas celulares y se liberan los organelos y macromoléculas como el ADN
¿Qué agente realiza la lisis?
La lisis química se realiza por un agente surfactante como el DNAzol, SDS ó CTAB
¿Qué ocurre durante la precipitación?
Se añaden sales que contienen cationes como Na+ o K+, los cuales reducen la fuerza repulsiva que existe entre las cadenas de ADN
¿Qué se agrega para que el ADN precipite?
Etanol absoluto frío, que deshidrata el ADN y permite que precipite
¿Qué ocurre en el lavado y qué se utiliza?
Se eliminan las sales que añadidas
Se utiliza etanol al 70%
¿Por qué es importante el lavado?
Es importante deshacerse de las sales porque impiden que el ADN sea estudiado mediante técnicas de bio-mol
¿Qué ocurre luego del lavado?
Se retira el etanol 70% y se seca la muestra a T° ambiente
¿Qué ocurre en la resuspensión y qué se utiliza?
Se preserva el ADN de la acción de las nucleasa, para lo cual se utiliza agua pura o TE (solución básica o alcalina) estéril
Se conserva a -20°C
El ADN absorbe luz a una longitud de onda de:
260 nm
Las proteínas absorben luz a una longitud de onda de:
280 nm
¿Cómo se determina la calidad del ADN?
ediante la relación entre la absorbancia A260nm y A280nm (valor > o = a 1.8 )
