7 Dot Blot (Manual) Flashcards
¿Qué es el Dot Blotting?
Técnica sencilla que utiliza como principio la hibridación del DNA. *Esto permite identificar una secuencia de DNA, incluso si está muy diluida en mezclas complejas.
¿Qué es la hibridación del DNA?
Proceso en el que dos hebras de DNA de cadena simple con secuencias complementarias interactúan para formar DNA de doble cadena.
¿Cómo se realiza la hibridación del DNA?
Se calienta el DNA a temperaturas altas para su desnaturalización
Se inmovilizan las cadenas monocatenarias en una membrana de nitrocelulosa o de nylon
Las membranas después se unen a secuencias complementarias, también monocatenarias.
Además del Dot Blot, ¿qué otras técnicas se basan en el principio de hibridación del DNA?
Southern Blot, desarrollada por Edwin Southern en 1975
DNA Chips o “Microarrays”
¿En qué se diferencia el Southern Blot del Dot Blot?
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En el Southern Blot, la muestra de DNA es digerida con enzimas de restricción y los fragmentos generados son separados en un gel de agarosa. Al final de la corrida, el gel se pone en contacto con una membrana de nylon o nitrocelulosa para llevar a cabo la transferencia del DNA.
DNA Chips o “Microarrays”
¿Para qué sirven? (de manera general)
También utiliza como base la hibridación para detectar a gran escala la presencia de secuencias específicas
DNA Chips o “Microarrays”
¿Ejemplo de uso?
Usualmente se utiliza para el análisis de expresión de genes en diferentes condiciones o para el análisis de la presencia de genes específicos
¿Para qué sirve la digestión del DNA en el Southern Blor?
Sirve para detectar secuencias específicas en una muestra y permite obtener, de un individuo, un patrón de bandas determinado llamado “DNA Fingerprint” (Huella digital de DNA).
Además de basarse en la hibridación, ¿qué tienen en común las técnicas como SB, DNA chips, y DB?
En todas las técnicas es necesario utilizar una sonda marcada que contiene la secuencia complementaria a fragmento de DNA que se analiza.
¿Cómo ayuda la sonda a detectar el fragmento que se analiza?
Si el fragmento está presente, la sonda se hibrida con éste y (como la sonda está marcada), es posible detectarla con varios métodos.
