T4_Diagnóstico laboratorial em Virologia

Question 1

Qual a colheita de amostra em virologia que não se faz em bacteriologia?

Answer 1

Zaragatoas

Question 2

Quais as colheitas de amostras possíveis?

Answer 2

Zaragatoas
Serologia
Fezes em recipientes esterilizados (coprocultura)
Aspiração de secreções

Question 3

Para que quadros clínicos usamos zaragatoas?

Answer 3

Zona de vesículas da varicela ou herpes - requer pressão para rebentar vesícula
COVID 19 - fazer aspiração da nasofaringe levaria a aerossóis

Question 4

Para que quadros clínicos usamos serologia?

Answer 4

Miocardite & pericardite
Contudo, a serologia não é o melhor método para o diagnóstico agudo (os anticorpos demoram a surgir) MAS biopsia/colheita de derrame pericárdico é invasivo/não há derrame

Question 5

Para que quadros clínicos usamos coprocultura?

Answer 5

Diarreias

Question 6

Para que quadros clínicos usamos aspiração?

Answer 6

Infeções do trato respiratório

Question 7

É possível diagnosticar uma pneumonia pneumocócica através de uma zaragatoa da nasofaringe? E nas infeções respiratórias virais?

Answer 7

Não porque somos frequentemente portadores de pneumococos
Sim porque não somos portadores e aquando de uma infeção respiratória baixa, os vírus estão presentes em todo o aparelho respiratório

Question 8

Como é feito o transporte de amostras?

Answer 8

Até 48h
4ºC (refrigerado não congelado)
Normas de segurança (ex. COVID19 coloca-se tubo com secreções dentro de contentor dentro de outro contentor)

Question 9

Quais os métodos de diagnóstico utilizados?

Answer 9

Exame cultural/isolamento = efeito citopatogénico nas células do laboratório
Pesquisa de Ag
Deteção do genoma
Serologia

Question 10

Qual o método de diagnóstico não utilizado?

Answer 10

Microscopia eletrónica - só usado na investigação, não no diagnóstico

Question 11

Qual o método de diagnóstico pouco utilizado? 2 exemplos de utilização para este método

Answer 11

Citologia = pesquisa de efeito citopatogénico do vírus nas células do doente (exame cultural é nas células do laboratório)
Papanicolau -> visualizar coilócitos causados pelo HPV
CMV -> visualizar células muito aumentadas

Question 12

Em que meio é que os vírus não crescem? Porque?

Answer 12

Gelose sangue porque são parasitas intracelulares obrigatórios. Só crescem em cultura de células

Question 13

Como é feito o exame cultural?

Answer 13

1. Semear a amostra (ex: urina, LCR)
2. Se a amostra tiver vírus, os vírus entram nas células e provocam alterações celulares - efeito citopatogénico do vírus.
3. Visualização das alterações num microscópio invertido (tem as objetivas por baixo e permite ver o frasco inteiro e o efeito citopatogénico nas células da cultura celular)
4. Confirmamos o resultado num microscópio de fluorescência
   Efeito citopatogénico = rastreio
   Imunofluorescência direta = confirmatório

Question 14

Quais as vantagens do exame cultural?

Answer 14

Isolamento das estripes
Específico (imunofluorescência)

Question 15

Quais as desvantagens do exame cultural?

Answer 15

Laborioso
Demorado
Perigoso

Question 16

Qual a aplicação principal de exames de cultura?

Answer 16

Laboratórios de referência para estudos epidemiológicos

Question 17

Qual o princípio da pesquisa de Ag?

Answer 17

Deteção de Ag de vírus por métodos imunoenzimáticos, imunocromatográficos, imunofluorescência ou imunoperoxidase.
Atualmente por imunocromatográficos

Question 18

A pesquisa de Ag é utilizada principalmente para?

Answer 18

Vírus respiratório & gastroenterites

Question 19

Quais as vantagens da pesquisa de Ag?

Answer 19

Rápido (15-30min)
Económico
Não requer treino por parte do técnico
Boa especificidade

Question 20

Quais as desvantagens da pesquisa de Ag?

Answer 20

Pouca sensibilidade
Possível ter teste negativo e infeção (relacionado com pouca sensibilidade)

Question 21

Quais as principais formas utilizadas para a deteção do genoma?

Answer 21

Amplificação de ácidos nucleicos
PCR & RT-PCR

Question 22

Qual a diferença entre PCR e RT-PCR?

Answer 22

PCR = normal (vírus de DNA)
RT-PCR = transcriptase reversa logo usado para vírus de RNA

Question 23

O que é o multiplex PCR?

Answer 23

Pesquisa na mesma reação vário alvos em simultânea

Question 24

Qual o tipo de infeção mais mortal? (não necessariamente com maior mortalidade mas que mata mais pessoas por ano)

Answer 24

Infeção respiratória

Question 25

Como é que se aumenta a sensibilidade nas amostras respiratórias nos adultos?

Answer 25

Colher amostras respiratórias baixas porque as superiores tem menos sensibilidade

Question 26

Quais as vantagens da deteção do genoma?

Answer 26

Sensibilidade
Especificidade
Deteção simultânea de vários vírus
Deteção de carga viral

Question 27

Quais as desvantagens da deteção do genoma?

Answer 27

Custo
Risco de contaminação

Question 28

Quais os métodos mais utilizados na serologia hoje em dia?

Answer 28

ELISA
Quimioluminescência

Question 29

Qual a utilidade dos métodos serológicos?

Answer 29

• Infeção crónica - HIV, hepatites… é bastante útil!
• “Estado imunitário/infeção antiga” - serve para determinar as IgG: quando temos IgG
  significa que a pessoa já teve contacto com o vírus. O facto de ter IgG não significa necessariamente que os anticorpos conferem imunidade vitalícia.
  NOTA: agudo não porque Ac demoram a aparecer