Proteiner Flashcards
Vad finns det för olika proteinstrukturer?
Primär = aminosyrasekvens Sekundär= Alfa-helix, beta-flak Tertiär= 3D konfigurering (globulär) Kvartär= Multiprotein sammansättning
Vad är den stora skilnaden mellan plasmaproteiner och intracellulära proteiner?
Plasmaproteiner är mer stabila och lösliga jämfört med intracellulära proteiner som oftast finns som membranbundna eller som del av ett multienzymkomplex.
Plsmaproteiner är mer oxiderade och har högre halter av kolhydrater (glykoproteiner)
Jämvikten är långsam mellan intravasala och extravasala rummen
Daglig omsättning för plasmaproteiner är lägre jämfört med extravasala proteiner
Förklara orden plasma, proteom och proteomik!
Plasma innehåller en komplicerad blandning av tusentals proteiner
Proteom är den totala uppsättning proteiner som finns i plasma
Proteomik innebär storskalig analys av proteiner i ett biologiskt prov
Var syntetiseras plasmaproteiner?
Huvudsakligen i hepatocyter
Makrofager, endotel
Var sker katabolismen av plasmaproteiner?
Sker mest i levern
Vissa proteiner utsöndras i urin
I hepatocyter= endocytos av proteiner som sedan deglykolyseras och klyvs till aminosyror med proteinas och peptidas.
Vad har plasmaproteiner för funktion?
Transport= Hem, albumin, transfferin
Kolloidosmotiska= ffa albumin
Hormoner= insulin, TSH, ACTH, PTH, GH
Regulatoriska= enzymer
Immundefens= Ig, komplementsystemet
Enzyminhibitorer= AAT, antitrombin, C1-esterasinhibitorer
Koagulation/fibrinolys= Proteiner som är involverade i koagulationens reglering och i fibrinolytiska systemet.
Vad är en Biuretreaktion?
Biuretreaktion= kopparjoner bildar i en alkalisk lösning ett violett komplex med proteiner i proportion till förekommande antal peptidbindningar.
BCG + albumin ⇒ grön färg (färgbindningsmetod)
Mäter reaktvitet
Vilka metoder används för att påvisa
Kemiska egenskaper
Aktivitet
Immunogenicitet
Fysiska egenskaper
Kemiska egenskaper= Absorption av UV
Aktivitet= enzymbaserade metoder
Immunogenicitet= immunokemiska
Fysiska egenskaper= elektrofores, kromatografi
Kombination av 2 metoder= immunofixation
När används turbidimetri/nefelometri?
För kvantitativ bestämning av proteiner i plasma, urin och andra kroppsvätskor
Reaktion mellan antigen och antikropp bildar ett komplex
Man mäter sedan grumligheten
Vad är skillnaden mellan turbidimetri och nefelometri?
Ljusspridning= Nefelometri
Ljushämmning= turbidimetri
Vad finns det för problem med nefelometri och turbidimetri?
Grunlighet i plasma ⇒ Typ Lipemi
Antigen excess
Kryoglobulin
Hur genomförs en elektrofores av plasmaproteiner?
Proteiner är positiva och negativa beroende på aminosyra och kolhydratsammansättning
Nettoladdningen är pH beroende
Vandringshastigheten i ett elektriskt fält avgörs av nettoladdning och buffertens jonstyrka
⇒ Vandringshastigheten är också beroende av stödmedlets ytladdning vilken ger upphov till sk elektroendosmos (buffertströmning i motsatt riktning).
⇒ Agarosgel har liten elektroendosmos
Agarosgel har en porstorlek på ca 150 nm vilket är optimalt för plasmaproteiner
Måttligt hög elektroforetisk upplösninng är optimal i kliniskt arbete
⇒ Efter elektroforesen färgas gelen ( Acid violet) och torkas.
== albumin, alfa1, alfa2, B, Y»_space;
Ge exempel på plasmaproteiner som ska mätas kvantitativt
Transtyretin Albumin Alfa-1 antitrypsin Haptoglobin Orosmucoid Transferrin Ceruloplasmin Fibrinogen CRP Procalcitonin Immunoglobuliner
Beskriv kort det du kan om akutfasproteiner!
Proteiner vars synteshastighet kan mer än dubblas vid akutfasreaktioner
CRP, alfa 1 antikymotrypsin, serumamyloid A, alfa1-antitrypsin, orosmucoid, haptoglobin, C3, C4, C4b-bindande protein samt fibrinogen
Tidsförlopp vid akut inflammation
CRP och alfa 1-antikymotrypsin stiger snabbast. Passerar referensgränsen 8-10 h oh T1/2< 24 h.
⇒ Ca 1 dygn senare börjar de andra akutfas proteinerna stiga (orosmucoid, haptoglobin, alfa1-antitrypsin, fibrinogen) T1/2= 3-6 dagar.
C3, C4, Ceruloplasmin ökar långsammare de följande dagarna.
Eventuell Ig reaktion sker efter ca 3 veckor.
Akutfasproteiner stiger i olika grad, kan stiga till > 100x normalt värde (tex CRP). Andra som C3, C4, cereloplasmin stiger mindre.
⇒ Olika inflammationer ger olika respons på samma protein. (tänk CRP vid bakteriell vs viral infektion).
Negativa akutfasproteiner
Albumin, prealbumin, transferrin
Vad är transtyretin?
När är det indikerat att ta ett sådant prov?
Syntetiseras i levern men även i plexus choroideus
halveringstid= 2 dagar
Binder och transporterar ca 10% av T3 och T4. Lägre affinitet för tyroxin än TBH
Vitamin A transport genom att det binder retinol bindande protein RBP
Indikation:
Något känsligare för malnutrition och minskade levercellsmassa än albumin.
Sänkta nivåer syns vid svält och fasta, inflammation, leversjukdom, östrogenbehandling, tyreoideasjukdom och vid ökad förlust
Höga nivåer syns vid behandling med glukokortikosteroider, androgen, aspirin och vid kronisk njurpåverkan (CDK)
När ska man ta ett albumin? När sjunker och när stiger albumin?
Relativt stabilt protein
Syntes i levern styrs av det kolloidosmotiska trycket
Katabolismen i levern sker via pinocytos i olika vävnader med degradering till aminosyror
Funktion=
Upprätthålla det kolloidosmotiska trycket (80%). Har låg MW men hög plasmakoncentration.
Transportprotein (bilirubin, CA2+, Cu, Zn, farmaka)
Metod= immunokemisk, färgbindningsmetoder
Sjunker= Inflammation Dålig nutrition Leverpåverkan Ökad katabolism Syntesdefekt Proteinförluster Ödem och acites
Ökar =
Stående ställning
Dålug hydrering
Förlängd tonicum applikation (typ dropp)
När stiger och sjunker haptoglobin? Vad är haptoglobin?
Haptoglobin
Syntes sker i levern
Syntes stimuleras av inflammation
Glykoprotein med 2 lätta alfa och 2 tunga beta kedjor
⇒ Variabilitet i alfa kedjor ger olika Hp fenotyper
Olika typer Hp 1-1, 1-2, 2-2 varav vissa bildar polymerer
Funktion= Binder hemoglobin irreversibelt och komplexet elimineras av hepatocyterna
Haptoglobin skyddar njurar och sparar järn
Sjunker:
Hemolys
Process som engagerar lever och mjälte
Barn upp till 13 år kan ha normalt låga värden
Stiger:
Inflamamtion, kan kvarstå i 1-2 veckor efter att inflammationen avtagit.
Vad är orosmucoid? När sjunker och stiger det?
Vilken analysmetod?
Syntes i levern
Ej helt känd funktion ⇒ Binder vissa basiska läkemedel
Nedreglering av immunrespons och trombocytaggregation
Stiger:
Inflammation (tillsammans med haptoglobin och fibrinogen vid inflammation i stödjevävnad)
Glykokortikoider och cushing
Sjunker:
Proteinförlust i tarm eller njurar (nefrotiskt syndrom)
Lever cirros
Östrogen tillförsel
Immunokemisk metod
Vad är transferrin? När stiger och sjunker det?
När tar man provet?
Plasmatransportprotein för järn
Syntes i lever och RES. Beroende på järntillgång.
Transporterar järn med mycket hög affinitet
Normal mättnad med Fe till ca ⅓
Receptorer för komplement finns på många celler ffa på erytropoesenes celler och på cellerna i trofobastvilli i placenta. ( Finns även löslig i plasma- bra mått på erytropoetisk aktivitet).
Indikation= Utredning av oklar anemi + löslig transferrinreceptor.
Misstanke om hemokromtos
Ökar vid:
Järnbristanemi
Östrogen
Anabola
Sjunker vid: Inflammation, malnutrition
⇒ Långvarig alkoholkonsumtion ger ett kolhydratfattigt transferrin ⇒ Kallas CDT, kan användas för att utreda alkoholism.
Vad är Ceruloplasmin?
När ser man höga resp låga värden?
Ceruloplasmin
Syntes i lever, makrfager, lymfocyter
Funktion= Transportprotein för koppar
Oxidering av Fe2+ till Fe3+ som sedan binder transferrin
Låga värden:
Lågt vid Mb wilson (hepatocellulär degeneration), kopparbrist samt genetisk acerulopasminemi.
Höga värden vid:
Inflammation, levercellskada och östrogenpåverkan.
Vad är fibrinogen? När stiger och sjunker det?
Fibrinogen
Glykoprotein
Syntes i lever
Stiger= Inflamamtion Nefrotiskt syndrom Kronsika infektioner Graviditet och östrogen
Sjunker=
Ökad konsumtion
Grav leverfunktionsnedsättning, cirros
Beskriv kort om CRP!
Syntes i lever
Aktivering av komplement
Receptor för CRP finns på T-celler
Stiger mer vid bakteriella infektioner vs virala
Oftast en över 50 mg/L vid virusinfektioner.
Vad är procalcitonin? När stiger det?
Prohormon till kalcitonin
Syntetiseras av C-celler i tyreoidea, men bildas också i många olika celler som svar på inflammatorisk stimuli.
PCT stiger inom 4h. ⇒ Tidigare än CRP
Bakteriella endotoxiner och proinflammatoriska cytokiner är kraftiga stimuli varför PCT i plasma stiger snabbt och kraftigt hos patienter med sepsis eller spetisk chock.
P-PCT >3 ug/L ⇒ Infektion med systemiska konsekvenser
>10 ug/L = SEPSIS
Används som slutenvårdsanalys.
Vad är en sänknings reaktion?
Inflammatorisk markör
Sedimentationshastigheten av erytrocyter beror på:
Täthetsskillnaden mellan erytrocyter och plasma och blodceller
Blodkropparnas storlek och plasmans viskositet
Fibrinogen och immunoglobinerna är 2 viktiga komponenter för bildningen
SR används som screeningtest på inflammatoriska sjukdomar.
Vad är extracellulära proteashämmare?
Hämmar proteolytiska enzymer som frigörs vid ex komplementaktivering, koagulationer, fibrinolys ⇒ Viktig skyddsfunktion
Serpiner (serinproteasinhibitorer), ex alfa1-antitrypsin, alfa 1-antikymotrypsin, antitrombin, C1 inaktivatorer
Icke serpiner = alfa 2 makroglobin, Cystatin C.
Vad är alfa1-antitrypsin?
Alfa1-antitrypsin
Serinproteashämmare
Syntes i levern
Olika genetiska PI (priteasinhibitorer) typer.
Funktion= inaktiverar snabbt serinproteaser bla granulocytelastas
Stiger=
Inflammation
Östrogen
Sjunker= Genmutationer kan ge sänkta nivåer Ökad konsumtion Proteinförlust Brist på alfa1-antutrypsin ⇒ Ger ökad risk för emfysem och KOL pga elasticitetförlust i lungan. Ger också ökad risk för levercarcinom och levercirros.
Hur görs en elektroforesbedömning?
Elektroforesbedömning
Inflammationsgrad och ev mönster Hemolys Alfa-1 antitrypsinbrist Ig-stegring ⇒ Poly, mono(m-kompenent) eller oligoklonal. IgA sänkning IgA-brist
Grad på inflammation (lätt till kraftig)
Mönster på inflammation
Harmonisk
Stödjevävnadslinje
Mönster som vid tarmengagemang, kortisonbehandling, sänkt GFR
Inflammation och samtidig hemolys/ lever och mjält engagemang
Inflammation och samtidig misstänkt alfa1-antitrypsinbrist
Vilka olika typer av Ig-stegringar kan man se?
Polyklonal
Oligoklonal
Monoklonal
När kan se en polyklonal Ig-ökning?
Polyklonal Ig ökning
Kraftig selektiv IgG-stegring kan synas vid SLE, KAH, även vid sjögren, tumörsjukdom, RA
Selektiv IgA-stegring ⇒ IgA nefrit, lung-tarm infektioner.
Selektiv IgM-stegring ses vid PBC, mykoplasma, parasitssjukdomar.
När kan man se en oligoklonal Ig- ökning?
Oligoklonal Ig-ökning
Ett mindre antal cellkloner prolifierar måttligt
Vanligt som ett övergående fenomen vid akuta infektioner
Ses ofa vid benmärgstransplantatinoer
Kvarstående oligoklonalitet ofta tillsammans med hypergammaglobulinemi kan ses vid kronisk inflammatorisk process (SLE).
När ser man monoklonal Ig-ökning?
Monoklonal Ig-ökning M-komponent Myelom Mb waldenström Andra lymfom och blodmaligniteter Amyloidos MGUS
⇒ Bedöms visuellt mha elektrofores
Vad talar för myelom?
Symtom
Hyperkalcemi, anemi, njurpåverkan
Röntgendiagnostik lokal skeletturkalkning
Ökade plasmaceller i benmärg
Sstor M-komponent
Nedtryckt bakgrundsgamma
Signifikant bence-Jones proteinuri
Ostelytiska lesioner i samband med multipelt myelom
Vad är Mb Waldenström?
Lymfatisk lymfom med IgM- M komponent kallas Mb Waldenström.
M-komponenter kan ha kryo-egenskaper och för att de ska bestämmas korrekt måste prov tas och analyseras i obruten värmekedja (37 grader).
Vad är en immunfixation?
För att bestämma typ av M-komponent
Hitta myclet liten M-komponent som syns dåligt i vanliga proteinfraktioneringen.
Vanlig elektrofores i agarosgel
Lösning med ak mot det specifika protein som ska identifieras (antigenet) appliceras på agarosgelen.
⇒ Dessa diffunderar in i gelen och binds till antigenet och det bildas ett immunkomplex som precipiterar (olösligt)
⇒ Därefter torkas och färgas gelen.
När kan man se sänkta immunglobuliner?
Sänkta immunoglobulin
Kongenitala hypo/ a-gammaglobulinemier
Kraftigt sänkt värde för några av Ig-klasserna
Förvärvade hypogammaglobulinemier
Ofta mindre uttalade sänkningar för en eller flera Ig-klasser
Vad är fria lätta kedjor och när kan man se dessa?
Fria lätta kedjor
Det produceras alltid ett litet molärt överskott av lätta kejor
Det finns normalt i låga halter i plasma
Ökad koncentratino med normal kappa/lambda kvot vid:
Sänkt glomerulär funktion
Infektion
Ökad koncentration med patologisk kvot=
Monoklonal expansion av plasmaceller
Amyloidos där amyloiden bildas av halva fria lätta kedjor
FLC= fria lätta kedjor
Mätning av plasma/serum FLC är metodberoende och patienterna bör följas upp med samma metod.
Vad är proteinuri?
Prerenal proteinuri: Kapaciteten för den tubulära reabsorbtionen överskrids (ex inflammation, myelom)
Vad är en glomerulär proteinuri?
Vad är en tubulär proteinuri?
Glomerulär proteinuri= Ökad permeabiliett (albumin + IgG)
Selektiv < 100 kDa
Oselektiv + medelstora proteiner (IgG)
Tubulär proteinuri=
Nedsatt reabsorbtion i tubuli
Tubulusskada
Läckage av plasmaproteiner distalt om glomeruli
Urinstick a
albumin/kreatinin kvot
Urinprotein fraktionering (stickprov och dygnsuppsamling).
Vad är albuminuri?
Albuminuri
Normalt små mängder i urin
Albuminuri pga defekt/skada i den glomerulära barriären
Starkt prediktivt prognostiskt värde vid njursjukdomar
Riskgrupper screenas (diabetiker, hypertoni) ⇒ Dygnssamling och stickprov.
Vad är en urin-proteinfraktionering?
Urin-proteinfraktionering
U-albumin, U-IgG, U alfa1-mikroglobin
U-kappa, Ulambda ⇒ Nefelometri eller turbidimetri
Bedömning av glomerulär och tubulär proteinuri
Förekomst av Bence-Jones proteinuri
Vad är Bence Jones proteinuri
Bence Jones proteinuri
Utsöndring av monoklonala fria lätta (kappa lambda) kedjor i urin
Avvikande kappa/lambda kvot
Monoklonala band band i urinelektroforesen
Hög utsöndring ofta vid myelom
Liten utsöndring vid MGUS
Vad är likvor?
150 mL
500 mL bildas dagligen i plexa chornideae
Elimineras till vena sagitalis
Skyddar, hydrodynamisk, metabolisk och immunologisk
Vad är blod-hjärn barriären? Vad kan man mäta för analyter?
Molekyler som passerar = fettlösliga ämnen (alkohol, nikotin, heroin).
Aktiv transport = glukos, kolin, aminosyror
Nedsatt passage= proteiner
Viktiga markörer:
Barriärskada = albumin i CSV och plasma
Intratekal Ig-syntes= Ig i CSV och plasma. ⇒ Isoelektrisk fokusering.
Demens= Tau, fosforylerat Tau, beta-amyloid Hjärnskada= S-100b (Serum!! markör) Likvorläckage= beta trace protein i CSV och serum.
Hur kan man bedömma proteinstatus i CSV?
Vi bestämmer P-IgG och CSV- IgG, P-albumin, CSV-albumin kvantitativt med nefelometri, samt gör en isoelektrisk fokusering.
Barriärskada
Intratekal IgG syntes
Varje protein slutar vandra vid sin isoelektriska punkt
Hur kan man bedömma barriärskada i CSV?
Albumin kan ej bildas intratekalt utan allt albumin i CSV beror på passage över blod-hjärn barriören
CSV albumin / P-albumin
Vad är en intratekal IgG-stegring?
IgG kan passera blod-hjärn barriären i ungefär samma utsträckning som albumin.
Kan bildas i CNS vid inflamamtorisk process
Uttryck för inflammation i CNS
IgG- isoelektrisk fokusering
Efter fokusering utförs immunofixation med enzymmärkt (peroxidas) IgG antiserum för detektering av oligoklonala band med IgG.
CSV bedöms tsm med serumprov
⇒ normalt finns inga band vid isoelektrisk fokusering
Förekomst av band i CSN tyder på intratekal IgG produktion.
