Monoklonala antikroppar som cancerterapi Flashcards
Vilka olika immunglobuliner finns i kroppen? Vilken IG typ används dom läkemedel?
IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) ⇒ Används i läkemedel IgD IgA IgM IgE
ungefär hur lång halveringstid har immunoglobuliner?
T1/2 = 1-3 veckor ⇒ krävs därför ständig produktion
Vad har sockermolekylen på immunoglobuliner för funktion?
Det finns sockermolekyler på antikroppen som är viktig för IgGs funktion.
Vad gör FAB delen av en antikropp?
FAB= antigen bindning
Vad är den hypervariabla delen av en antikropp?
Hypervariabel del= skiljer mellan alla IgG. Här finns den antigenbindande kapaciteten.
Vad är FC delen av en antikropp?
FC= medierar biologisk aktivitet
Var sitter den komplementbindande delen av en antikropp?
Det finns en komplementbindande del vid FC sidan.
Vad är en hinge region? Varför är den intressant? Biologisk funktion?
Hinge region = smal del
Känslig för enzymklyvning
Rörlig Ig molekyl pga hinge region
Varför binder IgG så starkt?
IgG binder så starkt på grund av att den har två bindingsställen.
Hur tillverkas antikroppar från ett hybridom?
1) Antikroppsproducerande B-celler från immuniserat djur.
Kan ej växa in vitro
Har alla enzym som behövs
2) Odlad tumör cell av B-cell typ
Producerar inga antikroppar
Ohejdad tillväxt men har enzymdefekt som gör att den inte kan växa i selektionsmedium.
⇒ Dessa fusioneras med ett ämne som luckrar upp cellmembranet
Endast fusionerade hybridceller kan växa in vitro
Det sker en selektion av äkta hybridom.
⇒ Sedan kontrolleras Ig-produktionen
⇒ Klonerna isoleras
⇒ EXPANSION
Alla antikroppar från ett hybridom gör identiska antikroppar ⇒ Monoklonala
Ett hybridom har evigt liv
Vad är mimetics?
små syntetiska molekyler som härmar många av antikropparnas egenskaper
Vad är det som är så bra med mab som terapi mot cancer?
Dödar med specificitet
Dödar även tumörceller som blivit resistenta mot annan cancerterapi
Dödar även “vilande” tumörceller
Kan kombineras med annan terapi utan ökad toxicitet
Vilka targets är önskvärda vid antikroppsterapi?
Måste finnas endast på tumörceller, ej på normala celler.
Finnas på ALLA tumörceller hos en patient
Finnas på många olika typer av tumörer
Sitter tillgängligt för antikroppar
Sitter fast ⇒ spjälkas ej av
Stabilt ⇒ förändras ej av tex mutationer.
Vilka normala antigen kan vara överuttryckta vid cancer?
Klonala antigen (idiotyper) ⇒ känner igen en T-cellsreceptor Differentierings antigen (tex CD20) Embryonala antigen (CEA, carcinoembryonic antigen) Överuttryckta antigen (HER2) Antigenuttryck i fel vävnad (MAGE)
Ge exempel på muterade antigener vid cancer
Oncogener, supressorer (RAS, p53)
Receptorer för tillväxt (EGFR)
Ge exempel på virusantigen som kan synas vid cancer
Papilloma, hepatit B, EBV
Ge exempel på targets som inte sitter på själva tumörcellen.
Antikropp mot molekyler på blodkärl
Antikropp som binder till molekyler på immunceller
Hur kan man använda blodkärl som target för cancer? Ge även ett exempel på läkemedel och indikation.
Blodkärl är essentiella för tumörens tillväxt
Targets som är tillgängliga via IV administration
Target som är stabilt (endotel), muterar ej.
Antiogenesis
Ny blodkärlsbildning
VEGF
Fibronection ED-B (matrix protein)
Integriner (adhesionsmolekyler)
PSMA (prostate specific membrane antigen)
Anti- VEGF (Avastin)
Används för behandling av kolorektalcancer
⇒ Mest framgångsrik som behandling mot makular degeneration, en ögonsjukdom där det växer blodkärl i ögat.
Hur fungerar Anti- CTLA4; iplimimumab?
För att aktivera en T-cell:
B7 finns på APC och kan aktivera eller stänga av T-cellen beroende på vad den binder in till.
B7- CD28 ⇒ Aktivering av T-cell
B7- CTLA4 ⇒ inhibering av T-cell
⇒ Vi vill hindra att CTLA4 binder in till B7 ⇒ Det gör T-cellen mer aktiv och kan döda fler tumörceller.
Hur fungerar Anti-PD-1 ; programmerad cell death 1 vid cancer?
PD1 ligand på APC och PD1 = STOP i maskineriet
⇒ Stoppar T-cells aktivering
Anti PD-1 blockerar PD1 vilket gör att inget stop finns ⇒ Ger mer aktiva T-celler som kan döda tumörer.
På vilka 5 sätt kan nakna antikroppar döda tumörceller?
Negativ signalering
Tex ak mot CD20 ⇒ gör att cellen går i apoptos när antikroppen binder in ⇒ negativ signalering
Receptorblockad
Onartuzumab tex
Anti-hepatocyt growth factor receptor (cMet)
Mutation kan göra att levercellscancer både uttrycker HGF receptorn och producerar HGF (tillväxtfaktor). Antikropparna hindrar HGF från att binda till receptorn ⇒ Bra terapi vid levercancer.
Dimerisering inhibition
HER2 = receptor tyrosinkinas. De måste sättas ihop två och två för att signaler (dimerisering).
Pertuzumab⇒ Hindrar denna dimeriseing.
Komplementaktivering
Antikroppar som binder in till tumörceller och opsoniserar för komplementsystemet ⇒ MAC dödar tumören
Antibody dependet cellular cytotoxicity ADCC
NK-celler med Fc-receptorer binder ak på tumörcellen ⇒ Avdödar med perforin som gör hål i cellmembranet.
Hur är FcR viktiga vid design av antikroppar?
CD16 (FcRyIII) = NK-celler, makrofager, neutrofiler
CD32 (FcRyII) = makrofager, neutrofiler, trombocyter
CD64 (FcRyI) = Makrofager, neutrofiler, dendritiska celler
FcR binder olika subklasser av IgG med olika hög affinitet!!
Genetisk polymorfism påverkar bindingsförmågan
Det finns både stimulerande och inhiberande FcR
Modulera Fc-del på antikropparna genom att påverka glykosylering för att skapa optimal bindning till önskad Fc-receptor.
Hur fungerar konjugerade antikroppar?
Bystander effekt = Radioaktiva isotoper på antikroppar. Ger mer lokaliserad effekt.
ADEPT= antibody directed enzyme prodrug therapy
Man injicerar ett toxiskt ämne i prodrug form
När man tillsätter antikroppar med enzym klyver den prodrugsen till en toxisk produkt som endast angriper rätt cell.
Cytostatika, toxiner och cytokiner ⇒ Endast effekt på den cell som antikroppen bundit till.
Vad är immunoliposomer?
Små lipidvesiklar med drog/lm i. Man vill att läkemedlet hamnar på rätt ställe. När antikroppen binder in öppnar sig vesikeln och släpper ut läkemedlet (ofta cytostatika).
Vad är bispecifika antikroppar?
2 antikroppar tillsammans
Den ena antikroppen kan binda till tumörcellen och den andra till en effektorcell för att förstärka effektorcellens effekt.
Vad är Chimeric antigen receptor CAR T-cells?
Ersatt FcR med en antikropp
T-cells receptorn ersatt med mab
Man skördar patientens egna T-celler och genmodifierar dem ⇒ Sedan injiceras de tillbaka in i patienten
Vilka problem finns det med antikroppar som cancerterapi?
Immunogena Kort T1/2 För stora Når inte fram till tumörcellen Kan inte nå intracellulära targets Dyrt Biverkan Oklar anledning till låg “response rate”
På vilka sätt kan man rekombinera antikroppar?
Skapa mab med mindre storlek
Skapa mab som är mindre immunogena (humaniserade)
Skapa mab med högre affinitet
Skapa mab med förbättrad Fc-receptorbindning
Skapa nya konjugeringsmöjligheter
Vad är nanobodies?
Endast den hypervariabla delen används.
Vad är scFV= single chain fragment variable?
Det är en proteinkedja som veckats som det normala bindningsstället ⇒ Man knölar ihop den till 2 kedjor.
Kan presentera in i tumörer och nå svårt åtkompliga targetantigen
Kort halveringstid in vivo
Kan ha lägre bindningsaffinitet
Vad är en chimär antikropp?
Mus variabel del av den tunga och den lätta kedjan tillsammans med humana konstanta regioner
Vad är en reshaped antikropp?
Mus hypervariabel del tillsammans med humana variabla och konstanta regioner
Hur gör man en helt human antikropp?
Hybridom från transgena möss eller råttor med humana Ig-gener
Bibliotek av humana Ig-gener som transfekterats till E-coli (phage display libraries)
Hur görs en Fagdisplay teknik?
Bakteriofager med DNA från human Ig (bibliotek)
Man fäster det intressanta antigenet på en yta och tillsätter massa bakteriofager där några kommer att binda in.
Tvätt
Eluate
Låter bakteriofagerna infektera E-coli
Renar fram antikroppar från E.coli ⇒ Humana antikroppar.
Beskriv vad som händer när patienter bildar antikroppar mot antikroppar
Patienter bildar antikroppar mot atikroppar HAMA
⇒ Verkningsgraden blir sämre
Därför behövs det diagnostik för att mäta både nivån av terapeutiska Mab och för att mäta nivån av Ak som patienten bildat. Baserat på denna information kan läkaren styra doseringen.
Hur namnges antikroppar?
Del som anger användningsområde
Tu= tumör
Li= immunomodulerande
Suffix=
Murine, 0% human = Omab
Chimär 65% human = ximab
Humaniserad >90% = zumab
Human 100% = umab
