Genetisk diagnostik/tumördiagnostik

Question 1

Vilka frågeställningar finns för tumördiagnostik/ genetisk diagnostik?

Answer 1

• Prognos
• Cancer ja/nej
• Överlevnad?
• Återbesök hur ofta?
• Behandlingsalternativ?
• Risk för återfall?

Question 2

Vad kan man titta på vid tumördiagnostik?

Answer 2

Anamnes och symtom

Synliga förändringar

röntgen/ultraljud

Biopsier

Blodprover

Question 3

Vad kan man titta på i biopsier?

Answer 3

Biopsier ⇒ nålbiopsi, operation ⇒ Celler

Histopatologi
Flödescytometri

Question 4

Vad kan man titta på i blod?

Answer 4

Blodprov ⇒ celler, proteiner, DNA

Question 5

Förutom blod och biopsier, vilka andra kroppsvätskor kan användas?

Answer 5

Sputum
BAL (bronkiol lavage)
Likvor
Urin

Question 6

Fördelar och nackdelar med biopsier/vävnadssnitt?

Answer 6

Tumörbiopsi vävnadssnitt. Histopatologi

Tidskrävand men ger mycket information

Tumörtyp? Spridning av tumör i vävnaden? Nekros? Delningsfrekvens? Tumör infiltrerande immunceller.

Problem= kvantifiering, svarstider.

Question 7

vad kan man undersöka med ett finnålaspirat?

Fördelar/nackdelar?

Answer 7

• Morfologi

Olika färgsningsprotokoll
Andel celler av olika typ

Minst 200 celler bör undersökas
Celler i klump, ett problem

Frågeställning;

Finns det tumörceller i aspiratet?
Typ av tumör? Klassificering

Question 8

Vad är sentinal node diagnostik?

Vilka är frågeställningarna?

Answer 8

Sentinal node diagnostik (portvaktskörtel)

• Lymfknutor opereras ut. Mikroskopisk undersökning för att hitta förekomst av tumörceller i lymfknutorna.

Spridning till flera lymfknutor = dålig prognos

Frågeställning:
Risk för metastaser? Prognos? 
Är det nödvändig att ta bort alla lymfknutor?
Aggressive kirurgi 
Intensitet på behandling?

Question 9

När använder man flödescytometri för tumördiagnostik?

Answer 9

Används vid leukemi och lymfom

Question 10

Hur kan man använda ej specifika tumörmarkörer? Vad tittar man efter då?

Answer 10

Ej specifika tumörmarkörer= Normala lymfocytantigen men med abnormal distribution

Question 11

Vad är en aberrant fenotyp?

Answer 11

Aberrant fenotyp= Bortfall eller tillkomst av tumörer

Question 12

Vad är bifenotyp?

Answer 12

Bifenotyp= Markör för mer än en utmognadslinje

Question 13

Vilka är fördelar och nackdelar med flödescytometri (vid tumörutredning)?

Answer 13

Fördelar:

• Kan undersöka många parametrar samtidigt
• kvantifiering , undersöka tusentals celler
• Minimal residual disease MRD

Nackdelar

• Känsliga celler kan förstöras av analysen
• Sällsynta celler < 0,1% är svåra att hitta
• Ofta andra hands analys

Question 14

Hur kan man använda svaren från en flödescytometri i en tumörutredning?

Answer 14

Typ av leukemi eller lymfom, fenotyp?

Stadieindelning

Val av behandling, effekt av behandling, återfall?

Analys av andel celler i cellcykel baserat på kvantifiering av DNA i cellkärnor mha DNA bindande fluoroscerande färgämne.

Hur aktiva är tumörcellerna?
Val av behandling

Question 15

Vad är en biomarkör för cancer?

Answer 15

“ En biologisk variabel som speglar en fysiologisk förändring till följd av en sjukdom, läkemedelsbehandling eller annan yttre påverkan”

Question 16

Vilka användningsområden för biomarkörer för cancer finns det?

Answer 16

Misstanke ⇒ screening

Känd sjukdom ⇒ prognos, prediktion

Uppföljning ⇒ Monitorering

Question 17

Vilka screeningar finns det i Sverige?

Answer 17

Mammografi

Gynekologisk cellprov

2019 tjcok och ändtarmscancer, man screenar för blod i feces

Förslag för blockprov screening PSA för prostatacancer.

Question 18

Vad är syftet med screening med biomarkörer?

Answer 18

Screening med biomarkörer
Kan vi hitta friska personer som egentligen har cancer??

Syfte= Att sätta in behandling tidigt
Stort nät med fina maskor

Question 19

Vad innebär det att screeningen har hög känslighet men låg specificitet?

Answer 19

Hög känslighet= missar ingen som har cancer

Låg specificitet= pesoner kan bli felaktigt klassande som cancersjuka

⇒ Ställer höga krav på hur informationen hanteras dvs professionell uppföljning

Question 20

Ge exempel på 5 biomarkörer för tumörer?

Answer 20

Fria lätta kedjor 
c/t-19-9 
PSA prostate specific antigen 
Ca125
Alfa fetoprotein 
Carcinoembryonic antigen

Question 21

Vad är PSA och hur används det?

Answer 21

Prostate specific antigen PSA; glykoprotein

Kallekrin

Enzym i sädesvätska, låga mängder normalt i blod < 4ng/ml

PSA i blodet ökar med ålder. Förhöjt vid inflammation i prostata.

Ca 50% av män med prostatacancer har inte förhöjda värden.

PSA förekommer med andra serumproteiner men förekommer också fritt.

PSA kvot= fritt PSA jämfört med totalt PSA i serum.
fPSA/ tPSA
Följs över tid hos män med känd cancer
Följs i samband med behandling

Question 22

Borde vi screena med PSA? Hur många räddas?

Answer 22

Snabba enkla och billiga test
Hög känslighet, låg specificitet vilket kräver att vi tar hand om personer med ofarligt förhöjda värden.

Screening beräknas leda till att per 1000 män kommer 35-50 att överdiagnostiseras med prostatacancer varav 30 skulle få behandling i onödan. Vinsten å andra sidan skulle vara 1-4 färre dödsfall inom 15 år.

Question 23

Vad är CA125. Cancer associerat antigen 125 (mucin 16)? Hur används den som en biomarkör?

Answer 23

CA125. Cancer associerat antigen 125 (mucin 16)

Glykoprotein som bla finns i epitel i vagina.

Förhöjda värden i serum ses vid 50-90% av fall av äggstockscancer. Kan även vara förhöjt vid andra typer av cancer (lunga, bröst, pankreas)

Ej förhöjt vid tidig cancer

Ökar vid graviditet. Förhöjt vid tillstånd som retar epitel tex operation eller inflammation.

Frågeställning:
Förlopp vid känd cancer
Återfall efter operation

Question 24

Vad är alfa-fetoprotein? Hur används det som biomarkör för cancer?

Answer 24

Alfa- fetoprotein

Embryonalt antigen

Nyfödda >97 000 kIE/ml
Vuxna < 10 kIE/ml

Misstanke om primär levercellscancer eller testiscancer (teratom)
Korrelerar starkt till sjukdomsutveckling

Frågeställning:
Återfall?
Fungerar behandlingen?

Question 25

Vad är Carcinoembryonic antigen CEA och hur används det som biomarkör?

Answer 25

Carcinoembryonic antigen CEA
Embryonalt antigen i epitel. Adhesionsmolekyl.
Normalt < 5ng/ml i serum.
!! Ökar vid rökning

Kolorektalcancer
Urinblåsecancer (förhöjda värden i urn)

Följs över tid hos patientermed känd cancer
Frågeställning:
Återfall?
Behandlingseffek?

Question 26

Vad finns det för krav på biomarkörer?

Answer 26

Hantering av höga provmängder

Snabba resultat

Effektivitet, kostnadseffektivitet

Krav på automation

Question 27

Hur utför man en PSA analys?

Answer 27

Man använder 2 antikroppar.
Båda är anti PSA med mot olika epitoper.

Antikropp 1= biotinylerad och sedan binder streptavidin in till biotinet. Till streptovidin binder en magnetkula.

Antikropp 2= Denna antikropp har Ruthenium bundet till sig som lätt oxiderar. Denna avger fotoner som korrelerar med mängden PSA. En ljusdetektor läser av och avger volt till en elektrod.

Question 28

Vad finns det för prediktiva tester? Vad är det? Hur används de?

Answer 28

Prediktiva tester

• Löper denna person risk att utveckla cancer i framtiden?
• Genetiska analyser
• Livsstilsfrågor (rök, alkohol, radon)
• Biopsier som avsjöljar tidiga cellförändringar som kan utvecklas till cancer. (polyper i tarm, födelsemärken)

Question 29

När gör man onkogenetiska tester? På vilka indikationer?

Answer 29

Onkogenetiska undersökningar

Vid misstanke om ärftlig cancersjukdom.

Indikationer:
Ovanlig cancersjukdom
Ungt insjukande
Multipla primära tumörer hos samma individ
Förekomst av samma typ av cancer eller associerade cancerformer i minst 2 generationer i familjen.

Question 30

Ge exempel på prediktiva tester man kan göra för att förutspå om patienten kommer svara på behandling eller ej?

Answer 30

Diagnostik vid riktad behandling med monoklonala ak

Selektera patienter för behandling genom att kontrollera att tumörcellerna verkligen uttrycker den molekyl som antikroppen är riktad mot.
Tex anti- HER2

Question 31

Vad är companion diagnostics?

Answer 31

Companion diagnostics

Allt vanligare att samma läkemedelsföretag utvecklar diagnostiska test samtidigt som företaget utvecklar cancer läkemedlet ⇒ selekterar patienter till behandling eller inte behandling

Testar många ⇒ behandlar få

När är det motiverat med denna diagnostik?
Dyra behandlingar
Behandlingar som ger svåra biverkningar
Behandlingar där endast ett fåtal patienter förväntas dra nytta av behandlingen

Question 32

Vilken tumördiagnostik kan vi förvänta oss i framtiden?

Answer 32

Immunmodulerande behandling 
Cellfritt cirkulerande DNA 
Exosomer 
Tumörinfiltrerande immunceller 
Cirkulerande tumörceller

Question 33

Varför kräver ny immunmodulerande behandling annan diagnostik?

Vilka parametrar går att mäta?

Answer 33

Ny immunmodulerande cancerbehandling kräver ny diagnostik

Behandling med monoklonala antikroppar som hjälper immunsystemet att mer effektivt attackera tumörceller. Antikropparna blockerar molekyler som bromsar immunreaktionerna. (Immune check point inhibition, CTLA-4 PD1)

Vem ska få behandlingen? ⇒ Selektera patienter
Vem löper risk för svåra biverkningar? Risk för autoimmun reaktion.

Vilka parametrar kan man mäta?

Uttryck av bromsmolekuler på tumörceller
Antal av och uttryck ab bromsmolekyler på tumörinfiltrerade celler
Förekomst av autoantikroppar och/eller autoimmun sjukdom

Question 34

Hur kan man analysera cellfritt DNA i tumördiagnostiken?

Answer 34

Cellfritt cirkulerande DNA; Tumörer släpper ut mycket cellfritt DNA

Släpps ut i blodbanan från döda tumörceller (nekros eller apoptos)
Små fragment
Kan detekeras i plasmaprover från patient
Ökande mängd vid avancerad sjukdom
⇒ NGS för att identifiera olika typer av mutationer
⇒ ersätter vävnadsbiopsi.
Kan användas för att bedöma resistensutveckling hos tumörer.

Question 35

Hur kan man analysera exosomer i tumördiagnostiken?

Answer 35

Exosomer
Mikrovesiklar som släpps ut från celler via endosomala vesiklar
Finns i alla celltyper
Fingeravtryck av allt i cellen (RNA, DNA, cytoplasmatiska proteiner etc).
Finns i alla biologiska vätskor
!!! Finns i större mängd hos cancerpatienter
Stabila i provet

Question 36

Vad är immunoscore och hur används det?

Answer 36

Immunoscore

Viktigt hur många Cd3+ som finns i en tumör.
⇒ Bra prognos vid kolorektalcancer om det finns mycket CD3+ celler.

Question 37

Vad är en cellmap?

Answer 37

Cellmap

Mha bilder och datorer kvantifiera CD3+ celler i epitel

Question 38

Hur använder en CTC (cirkulerande tumör)??

Answer 38

Cirkulerande tumör celler CTC

Risk för metastaser?
Finns det tumörceller i blodbanan?

Utmaning= svårt att hitta en tumörcell bland många andra celler i blod och lymfa

Många nya metoder= ofta baserade på selektion av celler med epitelcell markörer eller baserat på storlek.

Question 39

Vad är cell search?

Answer 39

Cell search

Blodprov 7,5 mL
Man tillsätter magnetiska nanopartiklar kopplade till antikropp mot EpCAM. Cellerna fångas med magneter.
Visualisera och räkna fångade celler med fluorokromkonjugerade antikroppar mot intracellulära markörer för epitelceller (anti- cytokeratin PE) DAPI (kärnfragment) och anti CD45- APC.