Genetisk diagnostik/tumördiagnostik Flashcards
Vilka frågeställningar finns för tumördiagnostik/ genetisk diagnostik?
- Prognos
- Cancer ja/nej
- Överlevnad?
- Återbesök hur ofta?
- Behandlingsalternativ?
- Risk för återfall?
Vad kan man titta på vid tumördiagnostik?
Anamnes och symtom
Synliga förändringar
röntgen/ultraljud
Biopsier
Blodprover
Vad kan man titta på i biopsier?
Biopsier ⇒ nålbiopsi, operation ⇒ Celler
Histopatologi
Flödescytometri
Vad kan man titta på i blod?
Blodprov ⇒ celler, proteiner, DNA
Förutom blod och biopsier, vilka andra kroppsvätskor kan användas?
Sputum
BAL (bronkiol lavage)
Likvor
Urin
Fördelar och nackdelar med biopsier/vävnadssnitt?
Tumörbiopsi vävnadssnitt. Histopatologi
Tidskrävand men ger mycket information
Tumörtyp? Spridning av tumör i vävnaden? Nekros? Delningsfrekvens? Tumör infiltrerande immunceller.
Problem= kvantifiering, svarstider.
vad kan man undersöka med ett finnålaspirat?
Fördelar/nackdelar?
- Morfologi
Olika färgsningsprotokoll
Andel celler av olika typ
Minst 200 celler bör undersökas
Celler i klump, ett problem
Frågeställning;
Finns det tumörceller i aspiratet?
Typ av tumör? Klassificering
Vad är sentinal node diagnostik?
Vilka är frågeställningarna?
Sentinal node diagnostik (portvaktskörtel)
- Lymfknutor opereras ut. Mikroskopisk undersökning för att hitta förekomst av tumörceller i lymfknutorna.
Spridning till flera lymfknutor = dålig prognos
Frågeställning: Risk för metastaser? Prognos? Är det nödvändig att ta bort alla lymfknutor? Aggressive kirurgi Intensitet på behandling?
När använder man flödescytometri för tumördiagnostik?
Används vid leukemi och lymfom
Hur kan man använda ej specifika tumörmarkörer? Vad tittar man efter då?
Ej specifika tumörmarkörer= Normala lymfocytantigen men med abnormal distribution
Vad är en aberrant fenotyp?
Aberrant fenotyp= Bortfall eller tillkomst av tumörer
Vad är bifenotyp?
Bifenotyp= Markör för mer än en utmognadslinje
Vilka är fördelar och nackdelar med flödescytometri (vid tumörutredning)?
Fördelar:
- Kan undersöka många parametrar samtidigt
- kvantifiering , undersöka tusentals celler
- Minimal residual disease MRD
Nackdelar
- Känsliga celler kan förstöras av analysen
- Sällsynta celler < 0,1% är svåra att hitta
- Ofta andra hands analys
Hur kan man använda svaren från en flödescytometri i en tumörutredning?
Typ av leukemi eller lymfom, fenotyp?
Stadieindelning
Val av behandling, effekt av behandling, återfall?
Analys av andel celler i cellcykel baserat på kvantifiering av DNA i cellkärnor mha DNA bindande fluoroscerande färgämne.
Hur aktiva är tumörcellerna?
Val av behandling
Vad är en biomarkör för cancer?
“ En biologisk variabel som speglar en fysiologisk förändring till följd av en sjukdom, läkemedelsbehandling eller annan yttre påverkan”
Vilka användningsområden för biomarkörer för cancer finns det?
Misstanke ⇒ screening
Känd sjukdom ⇒ prognos, prediktion
Uppföljning ⇒ Monitorering
Vilka screeningar finns det i Sverige?
Mammografi
Gynekologisk cellprov
2019 tjcok och ändtarmscancer, man screenar för blod i feces
Förslag för blockprov screening PSA för prostatacancer.
Vad är syftet med screening med biomarkörer?
Screening med biomarkörer
Kan vi hitta friska personer som egentligen har cancer??
Syfte= Att sätta in behandling tidigt
Stort nät med fina maskor
Vad innebär det att screeningen har hög känslighet men låg specificitet?
Hög känslighet= missar ingen som har cancer
Låg specificitet= pesoner kan bli felaktigt klassande som cancersjuka
⇒ Ställer höga krav på hur informationen hanteras dvs professionell uppföljning
Ge exempel på 5 biomarkörer för tumörer?
Fria lätta kedjor c/t-19-9 PSA prostate specific antigen Ca125 Alfa fetoprotein Carcinoembryonic antigen
Vad är PSA och hur används det?
Prostate specific antigen PSA; glykoprotein
Kallekrin
Enzym i sädesvätska, låga mängder normalt i blod < 4ng/ml
PSA i blodet ökar med ålder. Förhöjt vid inflammation i prostata.
Ca 50% av män med prostatacancer har inte förhöjda värden.
PSA förekommer med andra serumproteiner men förekommer också fritt.
PSA kvot= fritt PSA jämfört med totalt PSA i serum.
fPSA/ tPSA
Följs över tid hos män med känd cancer
Följs i samband med behandling
Borde vi screena med PSA? Hur många räddas?
Snabba enkla och billiga test
Hög känslighet, låg specificitet vilket kräver att vi tar hand om personer med ofarligt förhöjda värden.
Screening beräknas leda till att per 1000 män kommer 35-50 att överdiagnostiseras med prostatacancer varav 30 skulle få behandling i onödan. Vinsten å andra sidan skulle vara 1-4 färre dödsfall inom 15 år.
Vad är CA125. Cancer associerat antigen 125 (mucin 16)? Hur används den som en biomarkör?
CA125. Cancer associerat antigen 125 (mucin 16)
Glykoprotein som bla finns i epitel i vagina.
Förhöjda värden i serum ses vid 50-90% av fall av äggstockscancer. Kan även vara förhöjt vid andra typer av cancer (lunga, bröst, pankreas)
Ej förhöjt vid tidig cancer
Ökar vid graviditet. Förhöjt vid tillstånd som retar epitel tex operation eller inflammation.
Frågeställning:
Förlopp vid känd cancer
Återfall efter operation
Vad är alfa-fetoprotein? Hur används det som biomarkör för cancer?
Alfa- fetoprotein
Embryonalt antigen
Nyfödda >97 000 kIE/ml
Vuxna < 10 kIE/ml
Misstanke om primär levercellscancer eller testiscancer (teratom)
Korrelerar starkt till sjukdomsutveckling
Frågeställning:
Återfall?
Fungerar behandlingen?
Vad är Carcinoembryonic antigen CEA och hur används det som biomarkör?
Carcinoembryonic antigen CEA
Embryonalt antigen i epitel. Adhesionsmolekyl.
Normalt < 5ng/ml i serum.
!! Ökar vid rökning
Kolorektalcancer
Urinblåsecancer (förhöjda värden i urn)
Följs över tid hos patientermed känd cancer
Frågeställning:
Återfall?
Behandlingseffek?
Vad finns det för krav på biomarkörer?
Hantering av höga provmängder
Snabba resultat
Effektivitet, kostnadseffektivitet
Krav på automation
Hur utför man en PSA analys?
Man använder 2 antikroppar.
Båda är anti PSA med mot olika epitoper.
Antikropp 1= biotinylerad och sedan binder streptavidin in till biotinet. Till streptovidin binder en magnetkula.
Antikropp 2= Denna antikropp har Ruthenium bundet till sig som lätt oxiderar. Denna avger fotoner som korrelerar med mängden PSA. En ljusdetektor läser av och avger volt till en elektrod.
Vad finns det för prediktiva tester? Vad är det? Hur används de?
Prediktiva tester
- Löper denna person risk att utveckla cancer i framtiden?
- Genetiska analyser
- Livsstilsfrågor (rök, alkohol, radon)
- Biopsier som avsjöljar tidiga cellförändringar som kan utvecklas till cancer. (polyper i tarm, födelsemärken)
När gör man onkogenetiska tester? På vilka indikationer?
Onkogenetiska undersökningar
Vid misstanke om ärftlig cancersjukdom.
Indikationer:
Ovanlig cancersjukdom
Ungt insjukande
Multipla primära tumörer hos samma individ
Förekomst av samma typ av cancer eller associerade cancerformer i minst 2 generationer i familjen.
Ge exempel på prediktiva tester man kan göra för att förutspå om patienten kommer svara på behandling eller ej?
Diagnostik vid riktad behandling med monoklonala ak
Selektera patienter för behandling genom att kontrollera att tumörcellerna verkligen uttrycker den molekyl som antikroppen är riktad mot.
Tex anti- HER2
Vad är companion diagnostics?
Companion diagnostics
Allt vanligare att samma läkemedelsföretag utvecklar diagnostiska test samtidigt som företaget utvecklar cancer läkemedlet ⇒ selekterar patienter till behandling eller inte behandling
Testar många ⇒ behandlar få
När är det motiverat med denna diagnostik?
Dyra behandlingar
Behandlingar som ger svåra biverkningar
Behandlingar där endast ett fåtal patienter förväntas dra nytta av behandlingen
Vilken tumördiagnostik kan vi förvänta oss i framtiden?
Immunmodulerande behandling Cellfritt cirkulerande DNA Exosomer Tumörinfiltrerande immunceller Cirkulerande tumörceller
Varför kräver ny immunmodulerande behandling annan diagnostik?
Vilka parametrar går att mäta?
Ny immunmodulerande cancerbehandling kräver ny diagnostik
Behandling med monoklonala antikroppar som hjälper immunsystemet att mer effektivt attackera tumörceller. Antikropparna blockerar molekyler som bromsar immunreaktionerna. (Immune check point inhibition, CTLA-4 PD1)
Vem ska få behandlingen? ⇒ Selektera patienter
Vem löper risk för svåra biverkningar? Risk för autoimmun reaktion.
Vilka parametrar kan man mäta?
Uttryck av bromsmolekuler på tumörceller
Antal av och uttryck ab bromsmolekyler på tumörinfiltrerade celler
Förekomst av autoantikroppar och/eller autoimmun sjukdom
Hur kan man analysera cellfritt DNA i tumördiagnostiken?
Cellfritt cirkulerande DNA; Tumörer släpper ut mycket cellfritt DNA
Släpps ut i blodbanan från döda tumörceller (nekros eller apoptos)
Små fragment
Kan detekeras i plasmaprover från patient
Ökande mängd vid avancerad sjukdom
⇒ NGS för att identifiera olika typer av mutationer
⇒ ersätter vävnadsbiopsi.
Kan användas för att bedöma resistensutveckling hos tumörer.
Hur kan man analysera exosomer i tumördiagnostiken?
Exosomer
Mikrovesiklar som släpps ut från celler via endosomala vesiklar
Finns i alla celltyper
Fingeravtryck av allt i cellen (RNA, DNA, cytoplasmatiska proteiner etc).
Finns i alla biologiska vätskor
!!! Finns i större mängd hos cancerpatienter
Stabila i provet
Vad är immunoscore och hur används det?
Immunoscore
Viktigt hur många Cd3+ som finns i en tumör.
⇒ Bra prognos vid kolorektalcancer om det finns mycket CD3+ celler.
Vad är en cellmap?
Cellmap
Mha bilder och datorer kvantifiera CD3+ celler i epitel
Hur använder en CTC (cirkulerande tumör)??
Cirkulerande tumör celler CTC
Risk för metastaser?
Finns det tumörceller i blodbanan?
Utmaning= svårt att hitta en tumörcell bland många andra celler i blod och lymfa
Många nya metoder= ofta baserade på selektion av celler med epitelcell markörer eller baserat på storlek.
Vad är cell search?
Cell search
Blodprov 7,5 mL
Man tillsätter magnetiska nanopartiklar kopplade till antikropp mot EpCAM. Cellerna fångas med magneter.
Visualisera och räkna fångade celler med fluorokromkonjugerade antikroppar mot intracellulära markörer för epitelceller (anti- cytokeratin PE) DAPI (kärnfragment) och anti CD45- APC.
