Molekylära resistensbestämningsmetoder

Question 1

Varför kan man behöva använda molekylära metoder?

Answer 1

För att bakterien inte kan växa på normala medier (tex intracellulär) eller för att den växer dåligt. Alternativt om man vet exakt vilken gen som medierar resistensen kan det vara lättare att testa för den än att behöva testa fenotypiskt för massvis med olika antibiotika.

Question 2

Vilken PCR-metod används för MRSA?

Answer 2

SYBR green

Question 3

Hur fungerar SYBR green?

Answer 3

Det binder till dubbelsträngat DNA och emitterar en ljussignal

Question 4

Vad är en nackdel för SYBR green? Varför måste man använda sig av smältpunktsanalys?

Answer 4

Eftersom den binder till ALLT dubbelsträngat DNA så är det omöjligt att veta att man amplifierat rätt sak. Smältpunktskurvan indikerar storleken på amplikonet - ju längre DNA-sträng desto högre temperatur krävs för att denaturera den - och jämför man då smältpunkten för sitt prov med sin kontroll och de blir lika så vet man att man har amplifierat rätt sak.

Question 5

vad är spatypning? vad används det för?

Answer 5

Det är när man tar fram Spa-sekvensen från en MRSA-stam. idag görs det med helgenomssekvensering. Spa-sekvensen är som ett ”ID-kort” och kan användas för smittspårning

Question 6

Hur görs VRE-PCRen?

Answer 6

Med BD-max som använder Taqman-prober

Question 7

Hur fungerar TaqMan proben?

Answer 7

Den består av två delar, en fluorophor och en quencher. Quenchern stoppar fluorophoren från att exciteras. När DNA-strängen kopieras så delas proben upp och fluorophoren är fri att exciteras och emittera ljussignaler vilka kan mätas.

Question 8

Hur växer mycoplasma genitalium?

Answer 8

I endotelceller, nära kärnan (intracellulärt). Växer väldigt sakta och är mkt små.

Question 9

Varför är antibiotikabehandling av m. genitalium svår?

Answer 9

På grund av att den inte har någon cellvägg så blir många antibiotikasorter ineffektiva

Question 10

Med vilket antibiotika behandlas m. genitalium främst?

Answer 10

Azitromycin - en makrolid som binder till ribosomen och hämmar proteinsyntes

Question 11

Vilken mekanism medierar makrolidresistens hos m. genitalium?

Answer 11

Mutation i 23S rRNA-genen

Question 12

Vad tittar MGres på?

Answer 12

De två främsta mutationerna i 23S rRNA - A2058 och A2059.

Question 13

Vad undersöks vid TB-PCR?

Answer 13

PCR:en detekterar M.tuberkulosis-komplexet, och även de tre främsta resistensgenerna rpoB, kath och inhA