Méthylation et cancer Flashcards
Définir épigénétisme
« quand l’environnement influence la génétique »
Science qui étudie les mécanismes moléculaires qui modulent l’expression des gènes en fonction du contexte; sans impliquer des modifications intrinsèque des séquences d’ADN, sans modifier le génome
À quel endroit il y a méthylation sur l’ADN?
ajout d’un groupement méthyle (CH3) sur la cytosine par les DNA méthyltransférases (DNMTs)
ilôts CpG (200 à 2000 bp ) qui ont un contenu riche en G-C
ilôts CpG présents dans 70% des promoteurs des gènes chez l’humain
methylation des ilôts CpG des promoteurs des gènes inhibe la transcription
- empêche la liaison des facteurs de transcription à l’ADN
- compacte la chromatine
Nommer des gènes impliqués dans le cancer qui peuvent avoir un promoteur hyperméthylé
- Gènes supresseurs de tumeurs
gènes impliqués dans le cycle cellulaire
p16 INK4A (inhibiteur des CDK, freine cycle cellulaire)
- Gènes impliqués dans la réparation de l’ADN
MLH1
MGMT
Inversement, l’hypométhylation peut-elle être associée au cancer?
- cancers de la prostate métastatique, leucémies, foie,
- hyper-relaxation de la chromatine
- favorise la recombinaison entre les sequences répétées de l’ADN
Favorise l’instabilité génomique, donc le cancer
Quelle est la méthode de référence pour détecter la méthylation?
Conversion de l’ADN au bisulfite de sodium, suivi d’un PCR
Le C méthylé reste un C
Le C non méthylé devient un U
Expliquer la méthode de détection de la méthode de détection de la méthylation de MGMT à HSS
Échantillon d’ADN est traité au bisulfite deux réactions de PCR sont effectuées:
A- amorces méthylation spécifique
B- amorces non spécifique pour la méthylation
Si la séquence est méthylée, C → C, l’amorce va hybrider et générer un produit de PCR
si la séquence est non méthylée, C → U, l’amorce ne s’hybride pas et aucun produit de PCR
Quelle est la fonction de la MGMT
O6-methylguanine DNA methyltransferase
enzyme cruciale pour le maintient de la stabilité du génome
MGMT répare les lésions naturelles O6-methylguanine causées par les agents alkylants → guanine
prévient les erreurs subséquentes pendant la réplication et la transcription de l’ADN
Dans quels cancer peut-on retrouver une inactivation de la MGMT?
plusieurs cancers ont une inactivation de MGMT par méthylation du promoteur (col utérus, colorectal, oesophage, glioblastome, tête et cou, estomac, thyroïde, poumon)
Le degré de méthylation du promoteur de MGMT indique quoi?
Indicateur de la sensibilité d’un cancer à la chimiothérapie par agents alkylants
Les cellules tumorales utilise la MGMT pour réparer les dommages de l’agent alkylant. Donc on ne veut pas l’avoir dans le cancer si on veut une bonne réponse à la CT.
- si niveau élévé de méthylation de MGMT
→ MGMT inactif → agent alkylant est efficace meilleure réponse au Temozolamide meilleure survie
Pour les glioblastomes, l’hyperméthylation du promoteur MGMT est associé à quelle une meilleure réponse aux agents alkylants. V ou F?
V
Dans les glioblastomes, l’hyperméthylation du promoteur de MGMT associé à une meilleure réponse à la chimiothérapie par agent alkylant (Temozolamide)
→ l’évaluation de la méthylation de MGMT est un marqueur de sensibilité au traitement
Quel est l’effet sur l’ADN des agents alkylants?
agent anti-cancéreux, attache un groupement alkyl à la guanine de l’ADN
cytotoxique chez les cellules en prolifération active
cause une lésion à l’ADN = cassure double brins dans l’ADN
puissant inducteur de mort cellulaire par apoptose
MGMT répare l’ajout de groupement alkyl → contre l’effet de la chimiothérapie
Dans les glioblastome, l’hyperméthylation du promoteur de MGMT est associé à quelle délétion et quelle mutation?
associé à la co-délétion 1p19q et à la mutation IDH1
Quelles sont les difficultés des méthodes de détection pour évaluer la méthylation?
- conversion incomplète par le bisulfite (si des C non méthylés ne sont pas convertis en U, seront interprétés comme des C méthylés), fausse l’interprétation
- conversion au bisulfite cause une dégradation de l’ADN
- les conditions nécessaires à une conversion complète (température élevée, long temps d’incubation, concentration élevée de bisulfite) peuvent induire un taux de dégradation de l’ADN de 90%
- la fixation au formol (tissus FFPE) cause aussi une dégradation de l’ADN
→ affecte l’efficacité du PCR, limite la longueur des amplicons
Quand fait-on un test de méthylation du promoteur de MGMT?
test MGMT demandé par le neuropathologiste sur tous les gliomes de haut grade
(glioblastomes et les astrocytomes anaplasiques)
pour le clinicien, le résultat donne un indicateur de la réponse au traitement (Telozolamide), bénéfice de donner ou de continuer le traitement par le Telozolamide
Quel autre test peut être effectué pour détecter l’expression de la protéine MGMT?
Expression de la protéine AGT/MGMT en IHC
IHC MGMT pos → enzyme MGMT active dans la tumeur → mauvaise réponse
IHC MGMT neg → enzyme MGMT non présente dans la tumeur → bonne réponse
