Les méthodes électrophorétiques Flashcards
Le phénomène de déplacement d’une ___________sous l’effet d’un __________ est appelé ELECTROPHORESE (EP).
macromolécule chargée;
champ électrique.
Dans un milieu donné, la séparation des particules se fait en fonction de leur _______ et pour des ________, en fonction de leur ___.
charge;
charges identiques;
taille.
En fonction de différents paramètres: _______, ________, _______, ________, _______ la vitesse de migration va être variable, ce qui permet la séparation des différentes molécules.
charge;
masse;
forme;
nature du support;
conditions physico-chimiques.
L’électrophorèse permet de__________________. La séparation est _____.
traiter simultanément plusieurs échantillons en même temps;
fine.
Les substances ayant des groupes fonctionnels capables de s’ioniser en solution donnent naissance à des particules chargées positivement ou négativement. (V/F)
V
L’ionisation dépend de: _______________, ______________.
- Nature des composés;
- Milieu environnant: pH et la force ionique.
Pour les Ions _______, l’ionisation est simple : C’est la charge de ________ ou __________.
métalliques;
molécule ou particule solide: Q.
Les molécules ______________ présentent une ionisation complexe en raison de leur capacité à agir à la fois comme acides et bases.
organiques amphotères
Les ____________ sont de grandes molécules, comme des protéines ou des polymères, qui sont entourées par des molécules de solvant.
macromolécules solvatées
Le ______________ mesure la charge nette des macromolécules solvatées en solution.
potentiel électrocinétique
Lorsque le pH du milieu est tel que le nombre de charges positives est égal au nombre de charges négatives, la protéine possède une charge globale nulle et ne migre pas lorsqu’elle est soumise à un champ électrique, c’est le __________.
point isoélectrique (pHi).
La migration dépend de plusieurs facteurs : ____________ et _____________.
mobilité électrophorétique U;
forces de frottement f.
La mobilité électrophorétique U est fonction de la _______ et de la ________ de la particule.
charge;
géométrie.
Une particule de charge électrique Q, placée dans un champ électrique E, est soumise à une force F qui l’entraîne vers l’électrode de signe opposé: ____________.
F = Q * E
Des forces de frottement f, dues à la ____________, s’opposent à la migration de la particule.
viscosité du milieu ή
Loi de Stokes: ______________.
f = 6Π * η * r * v
f: forces des frottement;
η: viscosité du milieu;
r: rayon de la particule;
v: vitesse de migration.
Le coefficient de viscosité ή dépend de la _______________.
température
Il arrive un moment où les forces de mobilité et les forces de frottement s’équilibrent, et la particule se déplace alors à vitesse constante; on peut alors écrire: _____________________.
F=f;
Q.E = 6Π * η * r * v;
v= Q.E / 6Π.η.v
On définit pour chaque particule sa mobilité μ, de manière indépendante du champ électrique, par la relation: _____________________.
µ = Q/ 6Π.η.r
La mobilité est une caractéristique de chaque particule; il est donc possible d’effectuer une séparation en se basant sur cette propriété. (V/F)
V
La différence ________ détermine l’intensité de la charge Q d’une particule : plus cette différence est grande en valeur absolue, plus la charge est __________.
pH - pHi;
importante.
Si pH > pHi, la charge nette est ________, et la particule migre vers la _________.
négative;
anode (+).
Si pH < pHi, la charge nette est ________, et la particule migre vers la _________.
positive;
cathode (-).
Si pH = pHi, la charge nette est ________, et la particule migre vers la _________.
nulle;
elle ne migre pas.
La mobilité électrophorétique dépend de plusieurs facteurs: ____________, ___________, ____________, ___________, ____________, _____________.
a. Charge électrique nette;
b. Intensité du champ électrique;
c. Température;
d. Taille et géométrie de la molécule (forces de frottement);
e. Viscosité du tampon;
f. Courants liquidiens [courant d’électrolyse, courant d’évaporation (rhéophorèse), courant d’électro-endosmose (ou électro-osmose)]
Il existe principalement deux types d’électrophorèse: ________________ et ________________.
- Electrophorèse libre en veine liquide;
- Electrophorèse de zone sur support.
L’_____________________ est une technique où l’échantillon est contraint de se déplacer à travers une phase solide, généralement un gel ou une matrice, sous l’influence d’un champ électrique.
Electrophorèse sur support solide
Techniques d’Electrophorèse de zone sur support: ____________, __________, ___________, ___________, ____________, ____________, ______________, ______________, _______________, _______________.
Electrophorèse sur Papier filtre (membrane);
Electrophorèse sur Acétate de cellulose (membrane);
Electrophorèse sur gel d’Amidon (milieu gélifié);
Electrophorèse sur gel d’Agar-agar (milieu gélifié);
Electrophorèse en gel d’Agarose (milieu gélifié);
Electrophorèse sur gel de Polyacrylamide (ou PAGE pour Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis);
Focalisation isoélectrique (électrophorèse dans un gradient de pH);
Electrophorèse bi-dimensionnelle;
Electrophorèse en champ pulsé;
Immunoélectrophorèse.
Pour _________________, l’électrophorèse est en milieu liquide et aussi la migration.
ÉLECTROPHORÈSE LIBRE OU DE FRONTIÈRE
Il existe deux techniques d’électrophorèse libre ou de frontière: _____________ et ______________.
Electrophorèse En veine liquide;
Electrophorèse Capillaire de silice.
L’électrophorèse en veine liquide, également appelée électrophorèse libre est réalisée dans un _________________, permettant ainsi des mesures optiques à travers le tube, comme dans une _______________________.
tube en U de section carrée;
cuve de spectrophotomètre.
Electrophorèse en veine liquide
La séparation n’est pas totale, mais les frontières qui se forment sont mises en évidence par des méthodes _____comme ___________, ___________, ____________.
optiques;
absorption UV;
indice de réfraction;
fluorescence.
Electrophorèse en veine liquide
La migration s’effectue au sein d’un ___________________ soumis à un ___________________ continu.
liquide de composition déterminée;
champ électrique de courant.
L’électrophorèse de zone repose sur l’utilisation d’un __________ pour stabiliser la phase liquide.
support poreux
Electrophorèse de zone
Le support doit être ________, ________ et _________.
homogène;
poreux;
inerte.
Différents types de support peuvent être utilisés en Electrophorèse de zone: _______________ et ______________.
- Support en papier ou acétate (la migration des mélanges s’effectue à la surface de celui-ci);
- Support en polyacrylamide ou agarose (la migration des mélanges s’effectue à l’intérieur même du support).
Électrophorèse sur gel
Le gel est constitué d’une ______________baignant dans un _______________.
matrice de polymère (agarose et polyacrylamide);
tampon conducteur.
Électrophorèse sur gel
Les gels d’usage commun, l’agarose et le polyacrylamide, possèdent des pores de la taille des ____________.
protéines à séparer
Électrophorèse sur gel
La séparation moléculaire est basée non seulement sur la ________________ des molécules, mais aussi sur le principe de ______________.
mobilité électrophorétique;
filtration sur gel.
Électrophorèse sur gel
Les gels d’électrophorèse retardent les molécules de taille ___________.
plus grande
Électrophorèse sur gel
Le champ électrique et le tamis moléculaire agissent en ____________, ce qui produit un effet de vitesse de migration différentielle selon la ______, _______ et ________ des particules.
sens contraire;
taille;
forme;
charge.
Supports possibles pour l’électrophorèse sur gel: __________, _________, __________, ___________, ___________, ____________.
Papier;
Acétate de cellulose;
Gel de polyacrylamide;
Gel d’agarose;
Gel d’amidon;
Gel de silice.
Méthodes possibles pour l’électrophorèse sur gel: _________, ________, __________.
- Sur bande (papier, acétate de cellulose);
- Sur lame;
- En tube.
Electrophorèse libre - Lecture des résultats
L’_________________ permet de capter les variations de l’______________ sur l’une des branches du tube en U.
enregistrement photographique;
indice de réfraction.
Electrophorèse libre - Lecture des résultats
Dans le cas de l’électrophorèse capillaire, la ______________ est utilisée, avec un enregistrement des _____________ en fonction du temps.
lecture photométrique;
variations d’absorbance.