HPLC Flashcards
Principe de la chromatographie liquide: ___________________________.
Séparation fondée sur la différence de distribution des espèces entre deux phases non miscibles.
En Chromatographie liquide, la phase stationnaire peut être: ___________, ____________, _____________.
- Polymère moléculaire;
- Silice vierge ou greffée;
- Echangeurs d’ions.
En Chromatographie liquide, la phase mobile est ____________ ou ____________.
- Solvant pur;
- Mélange de solvants purs.
La répartition du soluté entre ces deux phases se fait selon le _______________.
coefficient de distribution K
K = ____________________.
K = Cs/CM;
Cs: Concentration du soluté dans la phase stationnaire;
CM: Concentration du soluté dans la phase mobile.
La CL peut être, selon la nature de la PS _______________ ou _______________.
Sur colonne (Adsorption, partage, échange d’ions, paire d’ions, exclusion);
De surface (CCM, Papier CP).
Chromatographie d’adsorption:
PS: _______________;
PM: ______________.
Chromatographie d’adsorption:
PS: Adsorbant polaire (gel de cilice, alumine) ou peu polaire (charbon actif);
PM: Solvant polaire (Méthanol) ou apolaire (Ether).
Chromatographie de partage en phase normale:
PS: _____________________;
PM: _____________________.
PS: Phase liquide fixe polaire (propylamine);
PM: Phase liquide peu ou moyennement polaire (isopropanol).
Chromatographie à polarité inversée de phase:
PS: _____________________;
PM: _____________________.
PS: Phase liquide fixe apolaire (chaine carbonée C8, C18);
PM: Phase liquide polaire (exemple : acétonitrile).
Chromatographie Appariement d’ion:
PS: _____________________;
PM: _____________________.
PS: Phase stationnaire apolaire (exemple : colonnes C8, C18);
PM: Phase éluante contenant le contre-ion.
Chromatographie Exclusion – Diffusion:
PS: _____________________;
PM: _____________________.
PS: Phase solide poreuse hydrophile (filtration sur gel) ou hydrophobe (perméation de gel);
PM: Phase liquide aqueuse (filtration sur gel) ou organique (perméation de gel).
Chromatographie Echange d’ions:
PS: _________________________;
PM: ________________________.
PS: Solide comportant des groupements fonctionnels ionisés, fixes, porteurs de charges positives ou négatives, et des ions mobiles de signe contraire assurant l’électroneutralité;
PM: Phase aqueuse ionique.
La CLHP dérive de la forme la plus ancienne de la chromatographie liquide ________ dont les performances, en termes de sélectivité et de résolution, ont été améliorées par l’utilisation de phases stationnaires ___________ et une phase mobile sur laquelle est exercée une _________ afin d’obtenir un débit convenable.
sur colonne;
très élaborées;
forte pression.
La CLHP fait intervenir des mécanismes d’échange soluté/phase mobile/phase stationnaire basés sur les _________________________.
coefficients d’adsorption ou de partage
La conception générale d’un appareil de Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP) comprend les éléments suivants : ___________, __________, ___________, ____________, ____________, _____________.
Réservoirs de Solvant;
Pompe;
Injecteur;
Colonne;
Détecteur;
Système de Traitement de Données.
Le volume injecté varie entre __ et ___.
10 et µl
Les pompes utilisées sont à haute pression entre __ et ___ barres.
50 et 350 barres
La colonne est caractérisée par _________ et __________.
longueur et diamètre
La phase mobile en HPLC se caractérise par sa ___________.
force d’élution
Le détecteur en HPLC est: _______, ________ ou ________.
- Détecteur UV;
- Fluoromètre;
- Réfractomètre.
La colonne est souvent précédée d’une _________, dite ___________, de __ à __ cm, remplie de la même phase stationnaire, ce qui sert à _________________, augmentant ainsi la durée de vie de la colonne principale.
précolonne;
colonne de garde;
0.4 à 01 cm;
retenir certaines impuretés.
Caractéristiques du gel de silice: _______________, ______________, ____________, _______________.
- Solide amorphe ayant pour formule de composition SiO2(H2O)n;
- Polymère inorganique réticulé;
- Comporte des groupements silanols « Si–OH » lui conférant un caractère acide (polaire);
- Comporte des pores de tailles différentes.
Le gel de silice est préparé sous forme de _____________ ou ____________.
- Microparticules sphériques;
- Monolithes poreux.
Le monolithe poreux de gel de silice forme ___________________.
une seule pièce dans la colonne même
Les microparticules sphériques sont de petites particules, généralement avec un diamètre constant de __ à __ micromètres.
1 à 12 µm
Les microparticules sphériques en terme de porosité: __________________ ou ________________.
- Pores de diffusion répartis dans la totalité de la particule;
- Particules poreuses en surface avec un noyau non poreux.
Avantages du gel de silice en HPLC: ___________, ____________, __________, _____________, ____________, _____________.
- Grande surface spécifique: matériau poreux donc grande surface d’échange;
- Grande résistance mécanique;
- Faible taille des particules;
- Répartition granulométrique très étroite;
- Particules sphériques (reproductibilité de remplissage);
- Réactivité avec des groupements silanols (possibilité de modification chimique et donc de greffage et donc obtention de phases stationnaires de sélectivités différentes).
Défauts du gel de silice en HPLC: ______________ et ______________.
- Rétention des solutés basiques par échange d’ions due au caractère acide des silanols (Pics en trainée);
- Solubilisation de la silice en milieu alcalin pH > 7.
Le gel de silice est ___________et n’est pas très utilisé tel quel en chromatographie.
très hydrophile
Afin de le rendre hydrophobe, le gel de silice subit des modifications qui consistent à lui greffer des molécules ________ à sa surface (fixation sur les groupements ____________).
organiques;
silanophiles.
La méthode de greffage la plus utilisée est : La ___________.
silinisation
La silinisation est une réaction entre une ___________ et les groupements silanols du support de silice avec formation d’une liaison chimique covalente dite __________.
organosilane;
pont siloxane.
Selon la nature du radical R de l’organosilane greffé, on distingue: ________________ et __________________.
Phase stationnaire polaire (-diol, -cyanopropyl, -aminopropyl…);
Phase stationnaire apolaire (-alkyl, phényl…).
La phase stationnaire polaire est retrouvée en chromatographie liquide_______________.
Partage en phase normale
La phase stationnaire apolaire est retrouvée en chromatographie liquide_______________.
partage en phase inverse
Exemples de phases stationnaires greffées: _________, _________, _________, ___________, ______________.
Aminopropyle (-(CH2)3 - NH2): Forte polarité;
Cyanopropyle (-(CH2)3 - C≡N): Polarité moyenne;
Octyle -(CH2)7-CH3: Apolaire (colonne C8 ou RP8);
Octadécyle -(CH2)17-CH3: Apolaire (colonne C18 ou RP18);
Phényle - (CH2)n - C6H5: Apolaire.
La colonne C18 est utilisée dans __% des analyses en chromatographie liquide de partage.
80
Pour la phase mobile en HPLC, on utilise un mélange binaire constitué de ___________ et ____________.
Solvant A faible: peu ou pas élutif;
Solvant B ofrt: Plus élutif que le solvant A.
Solvants faibles utilisés:
En NPC: _______________;
En RPLC: ______________.
En NPC: Apolaire ou peu polaire (Hexane);
En RPLC: Eau ou phase aqueuse tamponnée.
Solvants forts utilisés:
En NPC: _______________;
En RPLC: ______________.
En NPC: Plus polaire que le solvant A (DIchlorométhane);
En RPLC: Acétonitrile, Méthanol, Tétrahydrofuranne.
Evolution lors de la NPC: ______________puis _______________puis_______________.
Molécules apolaires;
Molécules moyennement polaire;
Molécules fortement polaires.
Evolution lors de la RPLC: ______________puis _______________puis_______________.
Molécules fortement polaires;
Molécules moyennement polaire;
Molécules apolaires.
Les Interactions soluté – solvant en HPLC: ___________, _____________, _____________.
- Forces intermoléculaires dipôle –dipôle;
- Liaisons hydrogènes;
- Liaisons ioniques (plus énergétiques).
La polarité d’un solvant s’exprime par : ________________ et _________________.
- L’énergie libre d’adsorption du solvant « εo »;
- Sa polarité selon Snyder « P’ ».
L’énergie libre d’adsorption entre en jeu en ____________________.
chromatographie d’adsorption
La force éluante de la phase mobile varie avec l’__________________ qui permet de contrôler la rétention des solutés.
énergie libre d’adsorption « ε0 »
Plus ε0 est élevée, plus la phase mobile est ____ et plus le facteur de rétention « k » est ______.
élutive;
faible.
L’indice le plus utilisé pour décrire quantitativement la polarité d’un solvant en chromatographie liquide est l’énergie libre d’adsorption. (V/F)
F: Indice de polarité de Snyder.
L’indice de Snyder est basé sur des mesures de solubilité de la substance étudiée dans 3 solvants et permet de déterminer les paramètres suivants: _____________, ________________, _________________.
χe : Mesure le pouvoir accepteur de protons par rapport à l’éthanol;
χd : Mesure le pouvoir donneur de protons par rapport au dioxanne;
χn : mesure les interactions dipôle – dipôle par rapport au nitrométhane.
L’indice de polarité est une mesure numérique des _______ de différents solvants.
polarités relatives
Pour chaque solvant on a : χe + χd + χn = __.
1
L’indice de polarité varie de -2 pour les ___________, très peu polaires jusqu’à 10,2 pour _____ qui est très polaire.
fluoroalcanes;
Eau.
Il faut trouver un compromis entre la viscosité de la phase mobile et la ____________ afin d’avoir une bonne résolution.
perte de charge (Pression)
Le ou les solvants constituant la phase mobile ne doivent pas absorber aux longueurs d’onde de travail. (V/F)
V
Chaque solvant est caractérisé par son ________qui est la longueur d’onde minimale à laquelle il peut être utilisé.
« cut off »
L’acétonitrile n’absorbe pas à des longueurs d’onde supérieures à ___ nm.
200
La caractéristique principale des solvants au point de vue purement chromatographique est: _______________.
Pouvoir élutif
Le pouvoir élutif dépend de la polarité de la phase mobile et des solutés. (V/F)
V
Plus il y a d’interactions entre le soluté et le solvant, plus le pouvoir élutif de ce dernier sera _____ et plus l’élution des solutés sera _________.
élevé;
rapide.
Il existe deux modes de travail en HPLC: ___________ et ___________.
Mode isocratique;
Mode à gradient d’élution.
Dans le mode isocratique, la composition de la phase mobile reste inchangée. (V/F)
V
Caractéristiques du mode à gradient d’élution: ___________, ___________, ____________, _____________, _______________.
-La composition de la phase mobile change au cours de l’analyse;
-La composition initiale est choisie pour séparer les solutés les plus rapidement élués;
-La force d’élution est augmentée pour éluer les solutés avec une sélectivité optimale;
-La composition finale est choisie pour éluer l’ensemble des solutés dignes d’intérêt;
-Possibilité d’augmenter la force éluante pour éliminer les solutés très retenus pouvant conduire à des contaminations.
Les détecteurs quasi-universels utilisés en HPLC: ____________ et _____________.
- Réfractomètre;
- Détecteur à diffusion de la lumière.
Les détecteurs spécifiques en HPLC: ______________, _____________ et ______________.
- Spectrophotomètre UV Visible;
- Spectrofluorimètre
- Détecteurs électrochimiques (ampérométrique, coulométrique conductimétrique).
La chromatographie liquide peut être mise en œuvre dans les monographies, sous les rubriques : ____________, ____________, _____________.
- Essai : pour la limitation de la teneur en impuretés d’une substance;
- Dosage : pour le dosage du principe actif;
- Identification (Rarement).
Dans une monographie, la description du système chromatographique doit comprendre les indications suivantes: _____________, __________, ____________, ____________, _____________, _____________, ____________, _____________.
- Dimensions de la colonne (longueur et diamètre intérieur);
- Nature de la phase stationnaire (dans le détail);
- Composition et débit de la phase mobile;
- Programme d’élution;
- Température de la colonne (si elle diffère de la température ambiante ou est réglée à l’aide d’un thermostat);
- Méthode d’injection (si cette précision est importante);
- Volume d’injection;
- Méthode de détection.
