Gammal tentamen 1 (finns på canvas) Flashcards
A) Selekterar utifrån storlek och färgomslag, här är det vanligt att man även använder pH-indikator.
Exempel: Chrom-agar?
B)Selektivt medium är designat för viss typ av bakterie/bakteriegrupp
Exempel: MSA:selekterar fram streptokocker
C) Berikat medie är ett medium med tillsatts av tillexempel tillväxtfaktorer eller andra saker som krävs för bakterieväxt.
Exempel: choklad-agar, bra för kräsna bakterier
Vid bakterieidentifikation av okänd bakterie kan man om man vet vilken grupp de kan röra sig om välja passande medier utifrån misstänkt patogen.
Här hade jag valt att odla ut på:
chrom-agar som ger olika patogener olika färg.
blodagar för att kunna studera hemolytisk förmåga hos misstänkt patogen.
Blåagarplatta som selekterar fram gram- bakterier och hämmar gram+. Jag får också extra info här då vi kommer få gulaktig färg om de rör sig om en laktosjäsare.
Jag skulle odlat i 37 grader.
Vad gäller test och jag inte vet vad de kan röra sig om bara att s.aureus orsakar sepsis.
Så hade jag börjat göra ett katalas test för att se om de är enterokocker/streptokocker och stafylocker. Hade vi fått ett positivt resultat hade de tytt på stafylocker. DÅ hade jag gått vidare och gjort ett koagulas test för att kunna utesluta eller påvisa s.aureus eftersom risken för sepsis finns. Sen kunde jag gjort novobiocin för att skilja s.saprofyticus från övriga kns.
Hade de istället varit katalas negativt hade de tytt på streptokock och då hade jag gjort ett esculin test, hade plattan varit svart hade tytt på enterokock och hade de ej vart svart så hade de vart streptokock.
Vid misstanke om streptokock hade jag studerat hemolys på blodagarplattan och gått vidare med antigen aggluation (beta-hemolys) (grupp bestämma a,c,g) eller optochintest (alfa-hemolys) (skilja streptokock och pneumokock) vid enterokock gjort ett arabinos test för att skilja på f.faecium och.facealis.
Yterligare test som kan göras är MALDI-TOF då denna metod direkt kan artbestämma från blododling.
Vid misstanke om s.aureus hade pcr för mec gen gjorts
MRSA
Första dagen hade jag hade gjort en odling på ett FOX-medie följt av dagen därpå gjort analys av nuc-genen mha PCR. Vid positivt resultat hade en ny odling gjorts och dagen därpå hade en PCR av mec-genen gjort och även nuc genen från framodlat isolat.
Nuc genen kollas först eftersom endast denna finns vid MRSA medan mec finns hos andra typer också
MALDI-TOF MS = Matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry
Jonisering: Prov appliceras på platta täcks med matrix lösning och beskjuts med laser i specifikt mönster. Provet joniseras genom protonövergång från matrix lösn.
Acceleration: Elektrisk fält skapas för att acceleration av de joniserade partiklarna. Jonlins fokuserar joner och deflektor plattor styr de mot detektorn högst upp i tuben.
Jondetektion: Joner med låg molekylär massa avlägsnas genom att vakumet om time of flight endast är beroende av massa. De som inte avviker når detektorn och vi får masstoppar
A) Man kan använda:
*inferonanalys:
- ELISA-quantiferon
- ELITSPOT-T-spot-TB
B) Man låter testpersonens t-celler utsättas för tb-antigen och har personens immunförsvar stött på de tidigare kommer inf-y att utsöndras.
CMIA
Akridinium-märkt konjugat(antikropp/antigen/syntetisk peptid) -> pre-trigger lösn -> trigger lösning
Leder fram till oxidation av akridinium vilket leder till utsänt ljus som kan mätas i RLU=relative light units
CLIA
alternativ till ELISA som är snabb, har stora variationsmöjligheter och har hög känslighet.
Luminescens används ist för colormetrisk. Mäts i RLU
Medelvärde av a rutor multipliceras med spädningsfaktor sen får jag räkna ut v2
för att titta på utbrott, smittspårning vad för stammar är vanligt på sjukhus osv
Ribosomen är en proteinfabrik som omvandlar mRNA till aa. Den består av en stor enhet och en liten enhet. Den mindre enheten består av 16s rRNA som innehållr 1500 baspar och dna-sekvenser som är identiska för bakterier. Den har också variabla regioner mellan de konserverade regionerna.
s
s
- Krävs riktad frågeställning
- Kan ge falska/negativa svar
- Ospecifika reaktioner, IgM
- Korsreaktivitet
- serokonvension kan ta tid
- Födröjt eller uteblivet humoralt immunförsvar
Komponenter:
- Templat
- Taq-polymeras: Påskyndar sammanfogningen av dNTP
- Nukleotider
- mix- Buffert: co-factor till DNA.polymeras
- Primer
Deoxyribose nucleoside triphosphate (dNTP)
dATP, dTTP, dCTP, dGTP
Process:
- Uppdelning av DNA sträng
- Inbindning av primer
- DNA-syntes
- Exponentiell amplifiering
Tempratur steg:
- Denaturering 95 grader, reaktionsvätska värms upp, Templat klyvs till 2 templat
- Anneling 50 grader primer hydrolyserar templat¨
- Elungenering 60 grader DNA-polymeras
DNA-polymeraset syntetiserar en ny DNA-sträng som är komplementär till templatet genom att tillsätta nukleotider som är komplementära till templatet i riktning från 5’-änden till 3’-änden.
Detta leder till en exponentiell amplifiering av det specifika DNA-fragmentet.
A) proben är en nukleotid sekvens märkt med flourofor som binder in till målsekvens mellan primerarna
B) Realtids pcr: med hjälp av standardkurva (spädningsserie av plasmid med känd konc)
PCR:
- Gelelektrofores, agaros
- Infärgning av DNA:
Etidium Bromid
Gel Red
Sybr green
C)
- Högre specifitet
- Minskad risk för kontaminering
- Synlig reaktion (kan följas i realtid)
- Tidseffektiv
- Genotyping
- identifiering av virus och bakterier
- molekylär epedemiologi
- resistensmutationer
A)
Densitetscentrifugering
Lysering av röda blodkroppar
B) Unika antikroppar mot specifika cellytemolekyler märkta med flourosence kan detekteras med flödescytometri.
De monoklonala antikropparna kan också kopplas med magnetiska kulor och med hjälp av magneter kan de då separeras
klistra in bild
