ELISA och CLIA 2020

Question 1

Vad är ELISA ?

Answer 1

ELISA = enzyme linked immunosorbent Assay

• Liknar RIA, men utan radioaktiv inmärkning
• Kan användas för att detektera både antigen och antikropp
• Väldigt känslig metod (pg/mL)
• Oftast används monoklonala antikroppar

Question 2

Vad finns de för varianter av ELISA

Answer 2

• Sandwich
• direkt
• indirekt
• kompetativ/inhibition
• Kvalitativ - negativ/positiv
• Kvantitativ - mängdbestämning mha standard

Question 3

Vad är användningsområdena för ELISA

Answer 3

• Detektion av både antikroppar och antigen
• T.ex. vid bestämning av serumantikroppar för t.ex. HIV, hepatit, herpes, variciella, CMV, EBV
• Vid detektion av virusantigen t.ex. hepatit
• vid detektion av födoämnesallergener inom industri t.ex. nötter, mjölk och ägg
• Vid detektion av olika läkemedel
• Vid analys av olika biologiska substanser t.ex. TNF-alfa, interferoner, hormoner

Question 4

Vad är skillnaden på polyklonala antikroppar och monoklonala antikroppar

Answer 4

Polyklonala

Multipla antikroppar som binder till samma antigen

• mus, råtta, kanin, får, get, häst

Monoklonala

Specifika antikroppar som binder till en del av antigenet

Question 5

Hur framställer man monoklonala antikroppar?

Answer 5

Question 6

beskriv hur du genomför en ELISA

Answer 6

1. Coatning av platta (antigen/antikropp) : Blockering

• Blockering sker med 1% BSA, 1% torrmjölk eller 10% kalvserum i PBS (/tween).
• Inkubering 1-2 h i rumstemp
• Blockeringen gör att inga tomma ytor finns i plasten.
• Tvätta x3 med PBS/Tween efter blockering

2. Tillsättning av prov

• Tillsatts av ev standard, kontroller + prov.
• Provet späds ofta för att spara prov och för att signal annars kan bli för stark

3. Detektionsantikropp

• Vanligen konjugerad med ALP eller HRP
• Mus, råtta, kanin, get, får, häst
• Monoklonal eller polyklonal

Avidin har hög affinitet för biotin, detektionsantikroppen är konjugerad med biotin. Enzymet är konjugerat med streptavidin

4.substrat

Substrat: ofärgat

• pNPP alt TMB används

5. Avläsning

Spektrofotometri

Question 7

Berätta om coatnings-buffert

Answer 7

Question 8

Hur genomför du en seriespädning?

Answer 8

Question 9

När använder man standardkurva och hur tillverkar du den?

Answer 9

Question 10

Berätta om ELISAs känslighet och vad är känsligheten beroende av?

Answer 10

Question 11

berätta om direkt ELISA även fördelar och nackdelar

Answer 11

Question 12

Berätta om indirekt ELISA även fördelar och nackdelar

Answer 12

Question 13

Berätta om sandwich ELISA även fördelar och nackdelar

Answer 13

Question 14

Berätta om ​Kompetetiv ELISA även fördelar och nackdelar

Answer 14

Question 15

Vad kan detta bero på:

• Positiv-negativkontroll
• Negativ-positivkontroll
• Svag signal

Answer 15

Question 16

När använder man dataanalys titer? Vad är titer?

Answer 16

Titer används när man inte kan göra en koncentrationsbestämning (mätning av specifika antikroppar)
Titer = Den inverterade spädningen där provet har högre signal än bakgrunden

Question 17

Vad är CHEMILUMINESCENCE IMMUNOASSAY, CLIA

Answer 17