Fundamentos de PCR Flashcards

1
Q

qué es una PCR?

A

reacción en cadena de polimerasa

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2
Q

quién introdujo la PCR y en qué año?

A

Mary Mullis en 1983

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3
Q

técnica de replicación in vitro de una molécula de ADNg

A

PCR

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4
Q

por qué se delimita la longitud del fragmento que se quiere replicar en una PCR?

A

primers o cebadores u oligonucleótidos

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5
Q

qué es el ADNg?

A

ADN genómico normal

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6
Q

PCR convencional

A
  • amplificación de una región genética específica
  • evaluación —> gel de agarosa o acrilamida
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7
Q

PCR cualitativo

A
  • identifica presencia o ausencia de un fragmentos específico
  • dx de enfermedades infecciosas
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8
Q

PCR semicuantitativo

A
  • permite conocer niveles de expresión de un gen (ARNm) (biopsias)
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9
Q

PCR cuantitativo

A
  • mide cantidad de microorganismos en ARNm
  • como referencia —> curva con muestras con concentraciones conocidas
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10
Q

PCR múltiple

A
  • amplificación de varias regiones génicas en una sola PCR
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11
Q

cuáles son los principios básicos de una PCR?

A
  • complementaridad
  • dirección 5’ —> 3’ (3’ debe de estar libre)
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12
Q

cuáles son las 3 etapas de una PCR?

A

desnaturalización
replicación
elongación

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13
Q

qué componentes se requieren para la PCR?

A

ADN
PRIMERS
DNA polimerasa
dNTPs
Magnesio (cofactor)

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14
Q

la DNA polimerasa ocupa de manera indispensable el __

A

magnesio

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15
Q

qué son los dNTP’s?

A

desoxinucleótidos libres en forma trifosfatada

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16
Q

cuál es la función de los dNTP’s?

A

estabilidad
formar enlace fosfodiester (nucleótido - nucleótido)

17
Q

con 50-200mM (dNTP’s) se sintetiza —>

A

6.5-25 mg de ADN

18
Q

a cuántos grados y por cuánto tiempo se desnaturaliza el ADN? inicio

A

95°C
5 min

19
Q

cuáles son los 3 ciclos de amplificación en la PCR?

A

desnaturalización (95°, 30s)
alineamiento (50-60°, 30-40s)
extensión (72°)

20
Q

a cuántos grados es la amplificación final?

A

72°

21
Q

a cuántos grados es el almacenamiento temporal de la PCR?

A

4°C

22
Q

cuándo se ponen los primers?

A

en el alineamiento

23
Q

cuántos ciclos de amplificación son?

A

35 aprox

24
Q

cuántas copias de DNA se pueden obtener una sola hebra?

A

muchas

25
Q

cómo es el proceso de visualización de amplificación PCR punto final?

A
  1. agarosa/acrilamida
  2. gel a la cámara y buffer de corrimiento
  3. pipetear muestras y marcador
  4. corrimiento
  5. comparar bandas de muestras vs marcador PM
26
Q

quién describió una la PCR en tiempo final y en qué año?

A

Higuchi 1992

27
Q

cómo se le llamó a la adaptación que hizo Higuchi?

A

PCR tiempo real/cuantitativa

28
Q

en la PCR de tiempo real se va observando el crecimiento de __

A

la curva de amplificación

29
Q

cuál es la ventaja de la PCR en tiempo real?

A

la puedes usar como cuantitativa o cualitativa

30
Q

cuáles son los pasos de la PCR en tiempo real?

A

Amplificación:
- desnaturalización
- alineamiento
- extensión
Detección —> fluorescencia
- SYMBER green
TaqMan

31
Q

SYBER GREEN es un intercalante y se inserta al __

A

medio de la cadena

32
Q

SYBER GREEN más usado

A

bromuro de etidio

33
Q

para qué se usa TAQMAN?

A

identificar SNPs

34
Q

la sonda de TAQMAN es __ para una región que quieras identificar

A

específica

35
Q

función principal de SYBR GREEN

A

expresión

36
Q

cuáles son los 2 fluoróforos que tienen las sondas?

A

VIC
FAM

37
Q

cuáles son las ventajas de PCR en tiempo real?

A
  • calcula eficiencia de reacción
  • no es necesario correr geles de agarosa
  • mayor rapidez y eficiencia
38
Q

cuáles son las aplicaciones de la PCR en tiempo real?

A

análisis de expresión (cáncer)
investigación (polimorfismos asociados a enferemdades) estudios caso-control
dx de enfermedades (SARS-COV2)