examen 1, cours théorique Flashcards
définir le terme clonage
ensemble des étapes nécessaires à la production d’une molécule d’ADN recombinante
de quoi est issue la molécule d’ADN recombinante
nommer les 2 acteurs
c’est la ligation entre un fragment d’ADN exogène et une molécule d’ADN réceptrice (vecteur de clonage)
quel est le résultat d’un clonage moléculaire
création d’une molécule d’ADN chimère
définir ce que sont en soit les clones de la molécule chimère d’origine
ce sont les copies de molécules d’ADN identiques produites après la création de la chimère
quel est le but principal du clonage moléculaire
3 buts**
il est utilisé pour analyser le rôle d’un fragment d’ADN
le fonctionnement d’un gène
ou pour produire la protéine correspondante dans un autre organisme
comment utilise-t-on les bactéries lors de clonage
on insère des gènes humains codant pour une protéine voulue dans une molécule d’ADN réceptrice d’origine bactérienne; dans un vecteur
la bactérie sert de mini-usine
nommer les étapes de clonage moléculaire de l’insuline par plasmide
-ouverture du plasmide par des enzymes de restriction
-libération du gène de l’insuline par des enzymes de restriction;
les deux sont coupés, isolés et colls ensemble; ligation du gène dans l’ouverture du plasmide
on peut ensuite multiplier la molécule d’ADN et produire une grande quantité d’insuline
nommer les 5 étapes officielles du clonage moléculaire
- Élaboration d’une stratégie de clonage
- Digestion et purification du vecteur et de l’insert digérés
- Ligation de l’insert avec le vecteur
- Transformation de la bactérie avec le produit de ligation
- Sélection/criblage et identification des transformants (clones) contenant la construction recherchée
définir ce que sont des enzymes de restriction
endonucléases qui sont capables de reconnaitre et couper une séquence spécifique À L’INTÉRIEUR de la double hélice d’ADN
que signifie la digestion d’une enzyme
le fait qu’elle coupe à un endroit précis
quelle est l’utilié des enzymes de restriction
2**
elles construient les molécules d’ADN recombinantes en coupant l’ADN en fragments qui peuvent être collés ensembles dans différentes combinaisons
peuvent aussi détecter des maladies ou mutations
comment sont liés les nucléotides entre eux
par la formation de liaison phosphodiester entre le carbone 5’ d’un ose et le carbone 3’ de l’ose adjacent
par convention, quel est l’ordre de lecture de la chaine d’acide nucléique
toujours dans le sens 5’P à 3’-OH
comment se nomment les séquences reconnues par les enzymes de restriction
quelle est leur particularité
ce sont des palindromes;
séquences se lisant de gauche à droite ou droite à gauche, indiféremment
quel est le résultat d’une digestion molécule d’ADN, mm si elle est circulaire
création d’extrémités libres
nommer les 3 types de molécules pouvant être produites suite à la digestion
- avec une extrémité 3’ saillante,
- avec une extrémité 5’ saillante, ou
- à bouts francs.
définir une extrémité franche
lorsque l’enzyme reconnait une séquence de 6 nucléotides et que le site de coupure est en plein centre;
ADN coupé de facon franche, sans base qui dépasse d’un côté ou de l’autre
puisque palindrome, les 2 sont pareils
définir une extrémité saillante ou cohésive
lorsque l’enzyme ne coupe pas en plein centre la séquence reconnue, il y a création d’extensions simple brin en 5’ ou 3’
ca fait des extrémités cohésives qui peuvent être recollées ensemble
définir ce que sont les ligases
enzymes capables de reconstituer la liaison phosphodiester entre 5’-P et 3’-OH de deux nucléotides adjacents d’un brin d’ADN
la ligase peut lier quel type d’extrémités ensemble
deux extrémités franches
ou
deux extrémités saillantes COMPLÉMENTAIRES
définir ce qu’est EcoR1
enzyme de restriction très utilisé en rencherche
premier détecté dans E.coli
que reconnait EcoR1
il reconnait GAATTC et coupe la séquence en laissant des bouts cohésifs
pk les bouts créés par la digestion d’EcoR1 peuvent être religuées
pcq les bouts francs créés sont complémentaires
pk l’action d’EcoR1 est jugé de clonage bidirectionnel
puisque ce sont des bouts complémentaires qui sont créés, on peut recoller les 2 côtés