CHAP 5; ligation et transfo Flashcards
décrire le principe de ce chapitre
procéder à une ligation du gène GFP avec le vecteur pUC19, puis à une transformation bactérienne des DH5a avec les produits de ligation
quelle est l’enzyme utilisée
la ligase du T4
que demande la ligase pour travailler efficacement
présence d’ATP et de Mg2+
*magnésium sert à favoriser l’extension des groupements phosphates de l’ATP
quelle sera la taille du vecteur final si pUC19 fait 2676 pb
3446 pb ;
2676 + 770
quel est le calcul de la quantité d’insert à utiliser dans un mélange de ligation
il faut un ratio molaire vecteur: insert 1:3
ng d’insert= (ng vecteur x taille d’insert kb)/taille du vecteur (kb) x ratio i/v
que veut dire le ratio molaire 1:3
il faut 3x de fragments gfp pour 1x fragment de pUC19 pour assurer une ligation réussie
utilisé pour les inserts plus petits que 800pb; gfp est de 770 pb*
calculer quelle est la quantité d’insert nécessaire si on a un vecteur pUC19 de 50 ng
43 ng d’insert
cmb y-a-t-il de molécules de gfp dans ce 43ng
il y en a 3; provient du ratio molaire 1:3
si l’insert est plus grand que 800pb, ou que le vecteur n’a pas été déphospho avant la ligation;
que devient le ratio molaire
1:6
