CHAP 6; induction d'expression dans bactéries Flashcards
décrire l’objectif de ce chapitre
induire l’expression de la protéine recombinante GFP dans l’un des transformants sélectionnés
qu’arrive-t-il lorsque IPTG est administré aux bactéries
il y entre et se lie au répresseur LacI, qui se trouve inactivé et ne peut plus se lier au promoteur Lac
restaure l’activité du promoteur, et ainsi, induit l’expression des gènes en aval du promoteur
cmt qualifie-t-on IPTG
c’est un régulateur allostérique négatif du répresseur du gène LacI
nommer les 6 composantes du tampon de lyse/chargement
1) Tris-HCl 1M pH 8
2) SDS 10%
3) 2-mercaptoéthanol pur
4) glycérol pur
5) bleu de bromophénol dilué 0,5%
6) eau déionisée pour compléter à 800ul final
définir le rôle du Tris-HCl 1M pH 8 dans le tampon de chargement/lyse
il permet de maintenir un pH stable pdt les manips, tout en protégeant les structrues biologiques et en réduisant l’effet des nucléases
définir le rôle de SDS dans le tampon de chargement/lyse
permet la lyse des membranes, la dénaturation des protéines et inhibe les nucléaires et les enzymes
définir le rôle du 2-mercaptoéthanol dans le tampon de chargement/lyse
sert à réduire les ponts disulfure (dénaturant les protéines), assurant une réduction et dénaturation complète
définir le rôle du glycérol dans le tampon de chargement/lyse
il permet d’augmenter la densité de l’échantillon afin qu’il se dépose au fond, stabilise les protéines et évite la formation de cristaux de glace pouvant endommager les protéines
définir le rôle du bleu de bromophénol dans le tampon de chargement/lyse
il sert de colorant de migration afin de visualiser le chargement et suivre la migration
définir le rôle de l’eau déionisée dans le tampon de chargement/lyse
va servir à compléter le volume final de 800 ul
