CHAP 10; rétro-transcription

Question 1

définir l’objectif de ce chapitre

Answer 1

préparer une banque d’ADNc pour chacun des échantillons d’ARN total intacts préparés précédemment

Question 2

qcq la rétrotranscription

Answer 2

c’est la synthèse d’un brin d’ADNc
à partir d’une séquence d’ARN

Question 3

quelle enzyme catalyse la rétro-transcription

Answer 3

la transcriptase inverse; propre au rétrovirus d’où elle provient

c’est une ADN polymérase

Question 4

les transcriptases inverses ne peuvent pas initier seules la synthèse d’un brin d’ADN

comment cela dbute-t-il

Answer 4

elles ont besoin d’une amorce possédant une extrémité 3’-OH libre

; ce sont les oligodt

Question 5

quel est le seul type d’ARN qui va être copié en ADNc grâce aux amorces

Answer 5

ARNm

Question 6

nommer les 2 étapes menant à la construction de la banque d’ADNc

Answer 6

1) hybridation des amorces oligodt à la région 3’ des ARNm contenus dans l’ARN total

2) synthèse d’un brin d’ADN complémentaire à chacun de ces ARN messagers

Question 7

quel gène dit domestique va être exprimé parmi l’expression de nos ARNm matures

Answer 7

celle de GAPDH;

tjrs exprimé de facon constante et élevée **car nécessaire à certains processus vitaux de la cellule

Question 8

fonction des oligoDT

Answer 8

servent d’amorce aux transciptases inverses afin de débuter la synthèse de l’ADNc

elles se lient aux queues polyA des ARNm sur l’extrémité 3’

Question 9

pourquoi faut-il incuber lors de la liaison des oligodt et les ARNm

Answer 9

il faut leur dénaturer correctement l’ARNm afin que les oligodt se lie aux queues polyA

(on évite les régions doubles brins de l’ARNm)

Question 10

si on refroidit trop rapidement les échantillons sur glace, que risque-t-il d’arriver

Answer 10

l’ARN risque de reformer des structures secondaires avant que les oligpdt ne s’y fixent correctement;