Enzymologie 2 Flashcards
Pour avoir un observable aisément détectable et quantifiable, quels sont les types de dosages possibles ?
- direct : quantification d’une coenzyme qui devient protonée avec la production de produits
- indirect : avec réaction auxiliaire avec coenzyme quantifiable, des fois il faut en rajouter plusieurs
Quelles sont les unités de la vitesse ?
En quelles unités s’expriment la Vmax ?
Quelles sont les différentes manières de rendre compte de l’activité d’une enzyme ?
Qu’est-ce que le rendement dans le suivi de purification d’une enzyme ?
Yield en pourcentage, c’est un rapport d’activités totales AT, il peut être global ou d’une étape
Comment se calcule les deux rendements à une étape ?
Qu’est-ce que le niveau de purification ?
C’est un rapport d’activités spécifiques AS global ou pour une étape, c’est sans unité et >1 sauf si c’est l’étape 1
Quelles sont les variations du rendement et du niveau de purification ?
Le rendement baisse alors que le niveau de purification augmente
Pourquoi l’histoire n’est pas aussi simple ?
Parce que les réactions enzymatiques sont multisubstrats
Quelle est la nomenclature des réactions enzymatiques multisubstrats ?
Quelle est la nomenclature des espèces réactives ?
Quels sont les mécanismes catalytiques possibles ?
Séquentiels aléatoires ou ordonnés et non séquentiels (ping pong)
Décrivez les mécanismes séquentiels
- formation d’un complexe entre tous les substrats et l’enzyme
- libération d’un premier produit, …
Présence d’un complexe ternaire EAB
Décrivez le mécanisme non séquentiel
- fixation d’un premier substrat
- libération d’un premier produit et d’une forme modifiée de l’enzyme
- fixation de l’autre substrat par cette forme modifiée, …
Pas de complexe ternaire
Quelle distinction mathématique peut-elle être observée ?
Quelles sont les constantes utilisées dans les réactions multisubstrats ?
Quelle est la différence entre les constantes de Michaelis et les constantes de dissociation ?
Les constantes de Michaelis décrivent la dissociation d’un constituant à partir du complexe ternaire alors que les complexes de dissociation des constituants à partir de complexes à 2
Décrivez le mécanisme séquentiel aléatoire
Qu’induit les 2 possibilités dans le mécanisme séquentiel aléatoire ?
Il induit 2 équations possibles
Décrivez le mécanisme séquentiel ordonné
Décrivez le mécanisme non séquentiel ping pong
Quel est le comportement d’une enzyme à plusieurs substrats si les autres substrats sont à concentration constante et/ou saturante ?
L’enzyme aura un comportement à un seul substrat, un comportement michaelien
Quelles sont les 2 grandes catégories des inhibiteurs enzymatiques ?
- inhibiteur réversible
- inhibiteur irréversible
Quelle est la différence des inhibiteurs réversibles et irréversibles ?
Quels sont les inhibiteurs réversibles ?
Inhibiteurs :
- compétitifs
- non compétitifs purs ou mixtes
- incompétitifs
Inhibition par excès de substrat ou produit
Donnez des exemples d’inhibiteurs irréversibles
- réactifs spécifiques de groupes
- analogues de substrats (marqueurs d’affinité)
- inhibiteurs suicides
Quels sont les intérêts et usages des inhibiteurs enzymatiques ?
Que désigne logiquement l’inhibition enzymatique réversible ?
Un ralentissement de la réaction
Pourquoi existent-ils des mécanismes différents ?
Car il y a des cibles différentes : fixation de I sur E ou ES ou E et ES
Décrivez l’inhibition compétitive
C’est une fixation exclusivement sur E libre avec une levée d’inhibition par excès de substrat
Comment diffèrent les courbes avec l’inhibition compétitive ?
Comment les valeurs diffèrent avec ou sans inhibiteur compétitif ?
Qu’est-ce que l’inhibition incompétitive ?
C’est a fixation exclusivement sur ES, sur un site qui lui est propre
Comment les courbes varient avec ou sans l’inhibiteur incompétitif ?
Comment diffèrent les courbes avec et sans inhibition non compétitive ?
Quelle est la différence entre les inhibiteurs pures et mixtes ?
Où interviennent les inhibiteurs compétitifs ?
Où interviennent les inhibiteurs incompétitifs ?
Où interviennent les inhibiteurs non compétitifs ?
Expliquez l’exemple de l’acétylcholine estérase d’inhibition par excès de substrat
Le site actif de l’enzyme possède un site estérasique (+) et un site anionique (-)
Qu’est-ce que la notion de concentration inhibitrice médiane ?
Elle donne une indication pratique de l’efficacité d’un inhibiteur
Selon la FDA, elle représente la concentration d’un médicament requise pour obtenir 50% d’un effet maximum in vivo
Avec un inhibiteur compétitif, quelle est la variation de
Il se rapproche de Ki aux faibles concentrations de S et l’efficacité de l’inhibiteur compétitif diminue quand la concentration de substrat augmente
Avec un inhibiteur non compétitif pur, comment varie
L’efficacité est indépendante de la concentration de substrat
Avec un inhibiteur incompétitif, comment varie
Il se rapproche de Ki aux grandes concentrations de substrat et l’efficacité de l’inhibiteur augmente avec la concentration de substrats
Chez les inhibiteurs compétitifs et incompétitifs, que font intervenir les formules de
Elles font toutes deux intervenir Ki et la concentration de substrat
Quelles sont les mesures de l’efficacité d’un inhibiteur ?
Quels sont les 2 types de site actifs ?
Quelles sont les caractéristiques structurales du site actif ?
Comment se fait la fixation du substrat ?
Par changement conformationnel
Quelles sont les méthodes indirectes ?
