dosage des hormones Flashcards
conditions pré-analytiques
- Le patient (à jeun, debout/couché, diète préalable, stress, exercice physique, heure de prélèvement)
-Prélèvement
(type de tube, contenant spécifique)
-Traitement du prélèvement (sur glace, traitement spécifique)
prélèvements qui requiert le jeune
GH, insuline, glucose
prélèvement cortisol
entre 8 et 16
pas de stress
transport prélèvement
- sang est métaboliquement actif
- acheminer le plus rapidement possible
- glace: éviter dégradation de petits peptides ou arrêt du métabolisme
- consommation ou production des substances à doser
méthodes analytiques
- chimiques (mesure changement d’absorption)/enzymatiques
- immunologiques
- chromatographie
mesure magnésium
-fait réagir magnésium avec calmagit, forme un complexe qui absorbe à 520nm et qui est proportionnel à la quantité de Mg
mesure protéines
protéines réagissent avec un colorant (rouge de pyrogallol)
lecture à 600nm
méthode enzymatique: glucose
utilise hexokinase pour former G6P. G6P va réagir avec G6Pdéshydrogénase pour former du NADH qui va absorber à 340 nm
avantages méthodes chimiques/enzymatiques
- automatisées: rapides
- simples/ très spécifique
- grande reproductibilité
- standardisation: souvent dispo
limites/interférences méthodes chimiques/enzymatiques
- concentration mmol/l ou g/l (méthodes pas très sensibles)
- T
- présence d’un substrat de structure proche ou qui absorbe à la même longueur d’onde
- hémolyse (bris des gr, peut interférer avec lecture photomètre)
- bilirubine élevée (pigment vert qui peut influencer mesure chimique
immunoessais
- utilisation d’un complexe Ag-Ac pour mesurer une molécule
- molécule à doser doit avoir au moins un Ac qui la reconnaît
- concentration: micromole, nmole, pole
taille suffisante pour générer la production d’un ac
- hormones (pas toutes)
- protéines
- médicaments
antigène
toute substance qui peut réagir avec un ac
épitope
petite région à surface de la molécule qui peut être reconnue par un Ac:
- une molécule peut avoir plusieurs épitoges (grosse molécule)
- reconnues par plusieurs Ac
spécificité
capacité de l’ac à reconnaître un seul Ag (malgré la présence de molécules similaires)
réaction croisée
si l’ac reconnaît également des Ag de structures proches de l’Ag cible
sensibilité/limite de détection
le plus faible signal détecté différent du zéro
limite de quantification (ou sensibilité fonctionnelle)
le plus faible signal détecté mais dont la variation est sous un certain seuil (ex: <20%)
- précision suffisante pour que le signal émis soit fiable
- méthodes de mesures doivent être en haut de leur limite de quantification
hormones stréroïdes
cortisol, androgènes, œstrogènes, aldostérone, vitamine D
hormones peptides/protéines
ADH, ACTH, GH, IGF1, FSH, LH,hCG, TSH, PTH, calcitonin, prolactine, insuline, peptide C, glucagon, AMH, Thyroglobuline
autres hormones (aa)
T3, T4, cathécolamines
V/F taille des hormones à influence sur la mesures en labo
V
types d’immunoessais avec marqueurs
-compétitifs ==> petites molécules ==> 1 seul Ac -non-compétitif: immunométriques (sandwich) ==> molécule de PM >3000uma ==> 2 Ac
Immunoessais compétitif avec séparation
- compétition entre Ag marqué (Ag*) et antigène à doser
- Ac en concentration limitante
- signal inversement proportionnel à l’Ag à doser (courbe sigmoïde)
- aux extrêmes: erreur plus grande
- doit pouvoir saturer Ac avec marqueurs
immunoessais compétitifs sans séparation (pas besoin de laver le libre du lier)
-plusieurs stratégies pour éliminer la phase de séparation
EMIT: enzyme multiplied immunoassay technique
-signal proportionnel à l’Ag à doser
-on a un Ag à doser, Ac et un Ag conjugué avec une enzyme (permet de révéler le signal)
-compétition entre Ag libre du patient et Ag lié à l’enzyme. Si l’Ag du patient lie l’Ac, activité de l’enzyme sera conservée et mesurée
-en absence d’antigène dans l’échantillon, Ac se lie à l’Ag de l’enzyme et activité enzymatique est diminuée.
-courbe proportionnelle
Essais immunométriques non-compétitif (“sandwich”)
- excès d’Ac
- Ag en sandwich entre 2 anticorps
- signal proportionnel à la quantité d’Ag à doser
- implique séparation
types de marqueurs
-radio-isotopes (RIA, IRMA): peu couteux et peur sensible toxicité/gestion des déchets. technique manuelle
-enzymatique:
phosphatase alcaline, peroxydase, B-galactoside ($)
-fluorescence ($)
-chimiluminescence ($)
chromatographie et spectrométrie de masse
-séparation de molécules selon caractéristiques physico chimique (on peut moins se tromper qu’avec les Ac
spectrométrie de masse quelles hormones?
- petites molécules: T3-T4, catécholamine
- Structures proches: hormones stéroïdiennes
- plusieurs isoformes: vit D
avantages spectrométrie de masse
- spécificité exceptionnelle
- sensibilité élevée
limites spectrométrie de masse
- coûteux
- temps technique long
- délicate: contamination facile
possibilité d’interférence: effet crochet
- excès d’Ag/Ac
- tellement d’Ag que sature tous les types d’anticorps et on peut pas faire sandwich car Ac de capture est aussi saturé. on obtient 0
- méthode immunométrique en 1 seule étape
- Ag sature les 2 types d’Ac
- Signal émis plus faible que la concentration réelle
- Impossible à prédire
- Dilution: signal augmente
Ac hétérophiles
- Ac qui réagissent avec un large spectre d’Ag
- peuvent réagir avec un large spectre d’Ag
- peut faire des faux positifs Ou des faux négatifs
forme macro
macroprolactne: prolactine liée à une immunoglobuline, non active, immunoréactive
solution: précipitation de la forme macro
