dosage des hormones Flashcards

1
Q

conditions pré-analytiques

A
  • Le patient (à jeun, debout/couché, diète préalable, stress, exercice physique, heure de prélèvement)
    -Prélèvement
    (type de tube, contenant spécifique)
    -Traitement du prélèvement (sur glace, traitement spécifique)
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2
Q

prélèvements qui requiert le jeune

A

GH, insuline, glucose

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3
Q

prélèvement cortisol

A

entre 8 et 16

pas de stress

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4
Q

transport prélèvement

A
  • sang est métaboliquement actif
  • acheminer le plus rapidement possible
  • glace: éviter dégradation de petits peptides ou arrêt du métabolisme
  • consommation ou production des substances à doser
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5
Q

méthodes analytiques

A
  • chimiques (mesure changement d’absorption)/enzymatiques
  • immunologiques
  • chromatographie
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6
Q

mesure magnésium

A

-fait réagir magnésium avec calmagit, forme un complexe qui absorbe à 520nm et qui est proportionnel à la quantité de Mg

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7
Q

mesure protéines

A

protéines réagissent avec un colorant (rouge de pyrogallol)

lecture à 600nm

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8
Q

méthode enzymatique: glucose

A

utilise hexokinase pour former G6P. G6P va réagir avec G6Pdéshydrogénase pour former du NADH qui va absorber à 340 nm

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9
Q

avantages méthodes chimiques/enzymatiques

A
  • automatisées: rapides
  • simples/ très spécifique
  • grande reproductibilité
  • standardisation: souvent dispo
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10
Q

limites/interférences méthodes chimiques/enzymatiques

A
  • concentration mmol/l ou g/l (méthodes pas très sensibles)
  • T
  • présence d’un substrat de structure proche ou qui absorbe à la même longueur d’onde
  • hémolyse (bris des gr, peut interférer avec lecture photomètre)
  • bilirubine élevée (pigment vert qui peut influencer mesure chimique
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11
Q

immunoessais

A
  • utilisation d’un complexe Ag-Ac pour mesurer une molécule
  • molécule à doser doit avoir au moins un Ac qui la reconnaît
  • concentration: micromole, nmole, pole
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12
Q

taille suffisante pour générer la production d’un ac

A
  • hormones (pas toutes)
  • protéines
  • médicaments
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13
Q

antigène

A

toute substance qui peut réagir avec un ac

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14
Q

épitope

A

petite région à surface de la molécule qui peut être reconnue par un Ac:

  • une molécule peut avoir plusieurs épitoges (grosse molécule)
  • reconnues par plusieurs Ac
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15
Q

spécificité

A

capacité de l’ac à reconnaître un seul Ag (malgré la présence de molécules similaires)

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16
Q

réaction croisée

A

si l’ac reconnaît également des Ag de structures proches de l’Ag cible

17
Q

sensibilité/limite de détection

A

le plus faible signal détecté différent du zéro

18
Q

limite de quantification (ou sensibilité fonctionnelle)

A

le plus faible signal détecté mais dont la variation est sous un certain seuil (ex: <20%)

  • précision suffisante pour que le signal émis soit fiable
  • méthodes de mesures doivent être en haut de leur limite de quantification
19
Q

hormones stréroïdes

A

cortisol, androgènes, œstrogènes, aldostérone, vitamine D

20
Q

hormones peptides/protéines

A

ADH, ACTH, GH, IGF1, FSH, LH,hCG, TSH, PTH, calcitonin, prolactine, insuline, peptide C, glucagon, AMH, Thyroglobuline

21
Q

autres hormones (aa)

A

T3, T4, cathécolamines

22
Q

V/F taille des hormones à influence sur la mesures en labo

A

V

23
Q

types d’immunoessais avec marqueurs

A
-compétitifs
==> petites molécules
==> 1 seul Ac
-non-compétitif: immunométriques (sandwich)
==> molécule de PM >3000uma
==> 2 Ac
24
Q

Immunoessais compétitif avec séparation

A
  • compétition entre Ag marqué (Ag*) et antigène à doser
  • Ac en concentration limitante
  • signal inversement proportionnel à l’Ag à doser (courbe sigmoïde)
  • aux extrêmes: erreur plus grande
  • doit pouvoir saturer Ac avec marqueurs
25
Q

immunoessais compétitifs sans séparation (pas besoin de laver le libre du lier)

A

-plusieurs stratégies pour éliminer la phase de séparation
EMIT: enzyme multiplied immunoassay technique
-signal proportionnel à l’Ag à doser
-on a un Ag à doser, Ac et un Ag conjugué avec une enzyme (permet de révéler le signal)
-compétition entre Ag libre du patient et Ag lié à l’enzyme. Si l’Ag du patient lie l’Ac, activité de l’enzyme sera conservée et mesurée
-en absence d’antigène dans l’échantillon, Ac se lie à l’Ag de l’enzyme et activité enzymatique est diminuée.
-courbe proportionnelle

26
Q

Essais immunométriques non-compétitif (“sandwich”)

A
  • excès d’Ac
  • Ag en sandwich entre 2 anticorps
  • signal proportionnel à la quantité d’Ag à doser
  • implique séparation
27
Q

types de marqueurs

A

-radio-isotopes (RIA, IRMA): peu couteux et peur sensible toxicité/gestion des déchets. technique manuelle
-enzymatique:
phosphatase alcaline, peroxydase, B-galactoside ($)
-fluorescence ($)
-chimiluminescence ($)

28
Q

chromatographie et spectrométrie de masse

A

-séparation de molécules selon caractéristiques physico chimique (on peut moins se tromper qu’avec les Ac

29
Q

spectrométrie de masse quelles hormones?

A
  • petites molécules: T3-T4, catécholamine
  • Structures proches: hormones stéroïdiennes
  • plusieurs isoformes: vit D
30
Q

avantages spectrométrie de masse

A
  • spécificité exceptionnelle

- sensibilité élevée

31
Q

limites spectrométrie de masse

A
  • coûteux
  • temps technique long
  • délicate: contamination facile
32
Q

possibilité d’interférence: effet crochet

A
  • excès d’Ag/Ac
  • tellement d’Ag que sature tous les types d’anticorps et on peut pas faire sandwich car Ac de capture est aussi saturé. on obtient 0
  • méthode immunométrique en 1 seule étape
  • Ag sature les 2 types d’Ac
  • Signal émis plus faible que la concentration réelle
  • Impossible à prédire
  • Dilution: signal augmente
33
Q

Ac hétérophiles

A
  • Ac qui réagissent avec un large spectre d’Ag
  • peuvent réagir avec un large spectre d’Ag
  • peut faire des faux positifs Ou des faux négatifs
34
Q

forme macro

A

macroprolactne: prolactine liée à une immunoglobuline, non active, immunoréactive
solution: précipitation de la forme macro