DNA replikation i eukaryota celler Flashcards
Vad heter DNA-helikaset och vad består det av?
DNA-helikaset; CMG-helikaset består av MCM, Gins och Cdc45.
Vad heter DNA-polymeraset på leading- respektive lagging-strand? Vad har de för aktivitet?
DNA-polymeraset på leading-strand; DNA-polymeras Epsilon.
3´–>5´ exonukleas aktivitet (proofreadning), arbetar tillsammans med PCNA (sliding clamp).
DNA-polymeras på lagging-strand; DNA-polymeras Delta.
3´–>5´ exonukleas aktivitet (proofreading) arbetar tillsammans med PCNA.
Vad har primaset (kombienzym) för funktion och uppbyggnad?
DNA-polymeras-alfaprimas.
4 subenheter, den största är ett DNA-polymeras. Enzymet startar DNA-replikationen på både leading- och lagging-strand, men lämnar sedan.
Har både primas och DNA-polymeras aktivitet.
Binder till mallsträngen och bildar en kort RNA-primer och sedan 20 nt DNA.
Därefter ersätts DNA-polymeras-alfaprimas av antingen DNA-polymeras epsilon eller DNA-polymeras delta.
Vad har sliding clamp (PCNA) proteiner för funktion?
Ökar processiviteten hos DNA-polymeras delta och epsilon genom att förhindra att de lämnar DNA-mallen. Sitter som en ring runt DNA. Låser DNA-polymeraset.
Nämn en autoimmun sjukdom med antikroppar mot antigener i cellkärnan, där antikroppar mot PCNA är mycket vanliga.
Systemic lupus erythematosus = SLE.
I vilken fas i cellcykeln sker DNA-replikationen?
DNA-replikationen sker endast i S-fas. Allt DNA replikeras EN gång i varje cellcykel.
Vart startar DNA-replikationen?
origins of replication
Vad är origin recognition complex (protein) ORC?
Binder alltid till eukaryota origins of replication. Ett komplex som består av 6 proteiner som sitter bundna till origin under hela cellcykeln.
Hur påbörjas DNA-replikation?
Vid aktivering rekryteras först två laddningsfaktorer (cdc6 och ctd1) till ORC.
Cdc6, Ctd1 och ORC laddar sedan MCM-helikaset på DNA:t i en ATP-beroende process.
Laddningen v MCM sker i G1-fasen (prereplikationskomplexet).
Beskriv regleringen av initiering under cellcykeln.
- CDK är proteinkinaser som reglerar cellcykelns progression.
- I S-fas stiger mängden av cyklinberoende kinas (CDK).
- CDK stimulerar laddning av Cdc45 och Gins på MCM. Detta tillsammans bildar det aktiva CMG-helikaset.
- CMG-helikaset smälter DNA vid origin of replication.
- DNA-polymeras-alfaprimas laddas och kan starta bidirektionell replikation.
- Viktigt att separera laddningen av MCM-helikaset från dess aktivering. På det viset säkerställs att DNA-replikationen endast initieras en gång under cellcykeln.
Hur kan ändarna på linjärt DNA replikeras?
Vi måste ha en RNA-primer.
5´änden på den syntetiserade strängen blir kortare (okazakifragment).
Ändarna på kromosomer kallas telomerer. Berätta om dessa.
Telomererna blir kortare med tiden i de flesta av våra kroppsceller. När de försvinner dör cellen.
Celler kan dela sig bara ett visst antal gånger.
Detta gäller dock inte cancerceller, könsceller eller stamceller, som kan fortsätta att dela på sig och deras telomerer förkortas INTE. Hur går det till?
- Det finns sk “omvända transkriptions enzymer” som kan syntetisera DNA med RNA som mall.
- Enzymet telomeras förlänger kromosomändar. Sker genom att lägga till en kort repeterande sekvens på 6 nt. Enzymet är ett omvänt transkriptas som har med sig en egen RNA-molekyl som den använder som mall för att syntetisera DNA-sekvenser (korta) om och om igen,
Aktivt telomeras finns tex i stamceller, könsceller och cancerceller. –> men får plats för primer så att det ursprungliga DNA ombildas i en del av sekvensen. –> 3´som varar oparad är det nya.
Vad är telomeras?
- Enzymet telomeras förlänger kromosomändar. Sker genom att lägga till en kort repeterande sekvens på 6 nt. Enzymet är ett omvänt transkriptas som har med sig en egen RNA-molekyl som den använder som mall för att syntetisera DNA-sekvenser (korta) om och om igen,
Aktivt telomeras finns tex i stamceller, könsceller och cancerceller. –> men får plats för primer så att det ursprungliga DNA ombildas i en del av sekvensen. –> 3´som varar oparad är det nya.
