Chap 7 Flashcards
Les 4 applications des protéines et leur degres de purification
Étude activité : 80-90%
Étude de structure : plus de 95%
Application industrielle : 50%
Application thérapeutique : plus de 99%
Quelles sont les avantages de l’isolation des protéines des tissus animales ? (3)
Protéine native
modification post traductionnelle
pas cher
Quelles sont les limites de l’isolation des protéines des tissus animales ? (4)
Sources limitées
Petites quantités de prot specifique
Pas d’etiquette
Pas tjrs reproductible
Quels sont les avantages de l’expression de protéines dans la bactérie ? (4)
Beaucoup de protéines et milieu pas, cher
rapide, culture, expression,
beaucoup de vecteur d’expression différentes
expression de protéines marquées est facile (RMN et rayon X)
Quels sont les limites de l’expression de protéines dans la bactérie ? 3
Pas de modifs post traductionnelles ou ponts disulfures
Pas bon pour les prot membranaires
Differents codons chez la bactérie
Solutions au problème de codons rares chez les bactéries ?
La synthèse des genes avec optimisation de codons pour les bactéries
On utilise quoi dans l’expression dans la bactérie ?
Operon lac avec IPTG
Quels sont les avantages de l’expression de protéines dans la levure ? (3)
Bcp de protéines et milieux pas chers
Ponts disulfures et certaines modif post traductionnelles
L’expression de protéines marquées est possible
Quels sont les limites de l’expression de protéines dans la levure ? (3)
Moins rapide que bactéries
Différents codons chez la levure
Pas bonne pour les protéines glycosylées
On utilise quoi dans l’expression dans la levure ?
Induction avec MeOH
Quels sont les avantages de l’expression de protéines chez l’insecte ? (4)
Ponts S et modif post trad
Bon pour protéines glycosylees
Vecteurs avec His-Tag et GST-tag
Meilleurs codons pour les grosses protéines humaines
Quels sont les limites de l’expression de protéines chez l’insecte ? (3)
Pas rapide et peu de prot
Milieux speciaux
Prot marquee compliquee
Quel est le vecteur et les cell utilisees pour l’expression de prot chez les humains ?
Vecteur pTT
Cellules HEK293-E6
(Croissance en suspension avec chaperon (pas de pb de codon))
Quels sont les avantages de l’expression de protéines chez l’humain ? (4)
Ponts s modif tradu et prot membranaires
Pas immunogene
His tag
Codon parfait pour tres gross prot humaines
Quels sont les limites de l’expression de protéines chez l’humain ? (4)
Pas rapide peu de prot
Besoin d’un fermenteur
Milieux speciaux
Impossible de faire des prot marquee
Apprendre le resume d’expression
Photo galaerie
Lors d’une purif qu’est ce qui se retrouve dans le surnageant ? Peut on faire une purification illimitee ?
Proteines solubles
Oui nptk quelle technique est possible
Lors d’une purif qu’est ce qui se retrouve dans le culot ? Peut on faire une purification illimitee ?
Corps d’inclusion
Non agent denaturant et certains types de purification
La précipitation de protéines est utile pour quelle etape ?
1ere etape capturer et isoler c’est semi selectif
C’est quoi le concept de la précipitation saline de prot ?
Augmenter de 10% a chaque fois la précipitation de sels (sulfate ammonium)
C’est laquelle des chromato qui est le plus faisable avec des prot denaturees ?
Chromatographie phase inverse
Difference entre une elution isocratique (lineaire) ou par gradient ?
Lineaire c’est plus facile moins cher mais moins efficace
Comment se fait la detection des signaux en general dans une chromatographie ?
UV
Lambda absorption des groupes amides des chaines R ? Lambda absorption des AA aromatiques ?
En bas de 250 nm
En haut de 250 nm
