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Macromolecules Biologiques > Chap 7 > Flashcards

Chap 7 Flashcards

1
Q

Les 4 applications des protéines et leur degres de purification

A

Étude activité : 80-90%
Étude de structure : plus de 95%
Application industrielle : 50%
Application thérapeutique : plus de 99%

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Q

Quelles sont les avantages de l’isolation des protéines des tissus animales ? (3)

A

Protéine native
modification post traductionnelle
pas cher

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3
Q

Quelles sont les limites de l’isolation des protéines des tissus animales ? (4)

A

Sources limitées
Petites quantités de prot specifique
Pas d’etiquette
Pas tjrs reproductible

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4
Q

Quels sont les avantages de l’expression de protéines dans la bactérie ? (4)

A

Beaucoup de protéines et milieu pas, cher
rapide, culture, expression,
beaucoup de vecteur d’expression différentes
expression de protéines marquées est facile (RMN et rayon X)

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5
Q

Quels sont les limites de l’expression de protéines dans la bactérie ? 3

A

Pas de modifs post traductionnelles ou ponts disulfures
Pas bon pour les prot membranaires
Differents codons chez la bactérie

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6
Q

Solutions au problème de codons rares chez les bactéries ?

A

La synthèse des genes avec optimisation de codons pour les bactéries

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7
Q

On utilise quoi dans l’expression dans la bactérie ?

A

Operon lac avec IPTG

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8
Q

Quels sont les avantages de l’expression de protéines dans la levure ? (3)

A

Bcp de protéines et milieux pas chers
Ponts disulfures et certaines modif post traductionnelles
L’expression de protéines marquées est possible

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9
Q

Quels sont les limites de l’expression de protéines dans la levure ? (3)

A

Moins rapide que bactéries
Différents codons chez la levure
Pas bonne pour les protéines glycosylées

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10
Q

On utilise quoi dans l’expression dans la levure ?

A

Induction avec MeOH

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11
Q

Quels sont les avantages de l’expression de protéines chez l’insecte ? (4)

A

Ponts S et modif post trad
Bon pour protéines glycosylees
Vecteurs avec His-Tag et GST-tag
Meilleurs codons pour les grosses protéines humaines

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12
Q

Quels sont les limites de l’expression de protéines chez l’insecte ? (3)

A

Pas rapide et peu de prot
Milieux speciaux
Prot marquee compliquee

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13
Q

Quel est le vecteur et les cell utilisees pour l’expression de prot chez les humains ?

A

Vecteur pTT
Cellules HEK293-E6
(Croissance en suspension avec chaperon (pas de pb de codon))

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14
Q

Quels sont les avantages de l’expression de protéines chez l’humain ? (4)

A

Ponts s modif tradu et prot membranaires
Pas immunogene
His tag
Codon parfait pour tres gross prot humaines

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15
Q

Quels sont les limites de l’expression de protéines chez l’humain ? (4)

A

Pas rapide peu de prot
Besoin d’un fermenteur
Milieux speciaux
Impossible de faire des prot marquee

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16
Q

Apprendre le resume d’expression

A

Photo galaerie

17
Q

Lors d’une purif qu’est ce qui se retrouve dans le surnageant ? Peut on faire une purification illimitee ?

A

Proteines solubles
Oui nptk quelle technique est possible

18
Q

Lors d’une purif qu’est ce qui se retrouve dans le culot ? Peut on faire une purification illimitee ?

A

Corps d’inclusion
Non agent denaturant et certains types de purification

19
Q

La précipitation de protéines est utile pour quelle etape ?

A

1ere etape capturer et isoler c’est semi selectif

20
Q

C’est quoi le concept de la précipitation saline de prot ?

A

Augmenter de 10% a chaque fois la précipitation de sels (sulfate ammonium)

21
Q

C’est laquelle des chromato qui est le plus faisable avec des prot denaturees ?

A

Chromatographie phase inverse

22
Q

Difference entre une elution isocratique (lineaire) ou par gradient ?

A

Lineaire c’est plus facile moins cher mais moins efficace

23
Q

Comment se fait la detection des signaux en general dans une chromatographie ?

A

UV

24
Q

Lambda absorption des groupes amides des chaines R ? Lambda absorption des AA aromatiques ?

A

En bas de 250 nm
En haut de 250 nm

25
Q

Les 3 filtres uv les plus importants pour les proteines ?

A

214 nm ou 228 nm le + sensible detecte le lien amide
254 nm le - sensible que les noyeux aromatiques
280 nm uniquement tyr et trp (pas phe)

26
Q

Principe de la chromato d’affinité ? Utiliser pour quelles etapes ?

A

Liaison specifique entre une prot et une resine qui est reversible
(On exploite une propriété biochimique unique de la prot)
Etapes 1 et 2

27
Q

Exemples de prot ligands et prot fusion pour chromatographie affinite ?

A

Ligand
ATP
GTP
NADP
Fusion
GST
His-6

28
Q

Role du bras espaceur ?

A

Minimise la liaison avec la matrice et les protéines

29
Q

De quoi est composé le tampon d’elution dans chromato affinité ?

A

Tampon de liaison + competiteur

30
Q

Quels sont les avantages dans la chromatographie d’affinité de fusion GST ? (3)

A

Augmente la solubilité de la protéine
Purif facile avec resine glutathion
Elution facile avec un petit ligand

31
Q

Quels sont les desavantages dans la chromatographie d’affinité de fusion GST ? (3)

A

Gros tag
Purif pas possible avec denaturant (conformation native)
GST forme un dimere (pas optimal pour les essais biologiques)

32
Q

Que faut il vérifier apres une chromatographie d’affinite ?

A

Verifier qu’il n’y a pas un site de coupure pour la protease de notre choix dans la prot

33
Q

Les 3 proteases les plus populaires ?

A

Thrombine
Facteur Xa
TEV

34
Q

Quels sont les avantages dans la chromatographie d’affinité de poly-his ? (4)

A

Purif facile avec resine nickel
Elution facile avec petit ligand
Purif possible avec détergents ET denaturants
Petite etiquette

35
Q

Quels sont les limites dans la chromatographie d’affinité de fusion poly-his ? (3)

A

Augmente la formation de corps d’inclusion
Purif pas possible avec antioxy DTT
Pas bon pour les prot qui lient les metaux de transition

36
Q

4 propriétés essentielles pour le competiteur ?

A

Liaison specifique mais reversible
Stable chimiquement et inerte
Pas trop cher
Petite taille moléculaire (separation dialyse)

Macromolecules Biologiques (13 decks)

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