Chap 11 : Cryo-microscopie Electronique

Question 1

2 caractéristiques dont ont besoin les ME

Answer 1

Volatage
Vide

Question 2

Les e- sont diffusés ou absorbés ?

Answer 2

Diffusés et le contraste augmente avec le defocus

Question 3

C’est quoi transformation de fourier ?

Answer 3

Signal qui est transformé en fréquences constituantes

Question 4

C’est quoi le CTF ?

Answer 4

Fonction de contraste de phase qui est une aberration degradant l’image du microscope

Question 5

C’est quoi le dé focus ?

Answer 5

Compromis entre le contraste et la résolution typiquement entre 1um et 3um

Question 6

Pour une meilleure resolution faut plus ou moins de de contraste ?

Answer 6

Peu de contraste

Question 7

C’est quoi le meilleur détecteur d’electrons ?

Answer 7

Detecteur direct d’electrons

Question 8

5 points importants du ME ?

Answer 8

Les images sont formées par la diffusion des électrons par le spécimen.

Le contraste est causé par l’interférence entre le rayon incident et diffusé

Le focus amplifie le contraste au détriment de la résolution maximale.

Les détecteurs d’électrons directes permettent de maximiser la détection d’électrons à haute IPS

Les échantillons typiques sont montés sur une grille de ME

Question 9

3 Types de techniques ME

Answer 9

Analyse de particules unique

Tomographie

Cristallographique à électron

Question 10

l’APU s’applique a quel type de mol ? Quelles sont les meilleures ?

Answer 10

N’importe quel mol purifiée
Celles de grandes tailles qui provoquent des grands contrastes

Question 11

C’est quoi les limites de l’APU ?

Answer 11

Limite de taille faut que les prot soient assez grosses
>50 kDa

Question 12

C’est quoi les diff entre coloration negative et cryo-ME

Answer 12

Coloration negative : marque la region sans prot possible d’analyse peu d’image car bcp de contraste mais limite de resolution

Cryo-ME : image bruyante donc besoin de bcp image mais bon resolution

Question 13

Dans quel contexte on préfère utiliser la ME par colo négative ?

Answer 13

Criblage initial
Marche bien pour des proteines

Question 14

Pk on utiliserait plutot la cryo-ME ?

Answer 14

Meilleure résolution mais demande bcp plus de données
La glace doit être vitrifiée tres vite aussi

Question 15

Est ce que les e- causent des dommages aux mol ?

Answer 15

Oui il faut eviter ceux inutiles

Question 16

Peut on corriger nos images ?

Answer 16

Oui si l’image est de bonne résolution on pourra bien estimer la CTF et la corriger

Question 17

Comment on fait pour retrouver notre mol d’interet ?

Answer 17

Classification en 2D puis reconstruction en 3D dans l’espace de Fourier

Question 18

C’est quoi la methode standard de reconstruction de nos jours ?

Answer 18

Reconstruction ab initio (a partir de données uniquement)
En prenant un blob gaussien et en filtrant les hautes fréquences pour eviter le bruit

Question 19

Comment on fait pour estimer la résolution d’une reconstruction ?

Answer 19

Via la correlation de sphere de Fourier qui mesure une sphere pour faire deux reconstructions indépendantes
Il faut donc 2 reconstructions 3D separees

Question 20

Comment déterminer l’hétérogénéité des complexes ?

Answer 20

Approche statistique

Question 21

Les 6 etapes pour obtenir une structure de haute resolution en APU ?

Answer 21

1- ajuster la dose e- pour limiter les dommages

2- corriger les mouv particules

3- estimer et corriger CTF

4- sélectionner puis classifier les particules

5- reconstruire un modele 3D

6- Gerer les heterogeneites avec classification 3D

Question 22

C’est quoi la tomographie ?

Answer 22

Plusieurs images du mm objet qui sont combinées pour une reconstruction 3D

Question 23

Comment sont les échantillons et le voltage en tomographie ?

Answer 23

Plus epais
Plus haut
(Limite du cone manquant affecte la résolution)

Question 24

Avantage de la cristallographie a electron que par rayon X ?

Answer 24

Les électrons interagissent mieux avec prot donc mm des petits cristaux peuvent générer de bons signals

Question 25

Pb de la cristallo a e- ?

Answer 25

Dommage induit par le rayonnement

Question 26

Donc dans la categorie imagerie de la Cryo-ME on a quel methode pour visualiser quoi ?

Answer 26

Cryo-tomographie : cellules , virus

Analyse de particules uniques : mol purifiees

Question 27

Donc dans la categorie cristallographie de la Cryo-ME on a quel methode pour visualiser quoi ?

Answer 27

Cristallo 2D : cristaux 2D

Micro ED : microcristaux 3D

Question 28

Qui a la meilleure limite de résolution et qui le plus rapide entre RMN cristallo X et cryo-ME ?

Answer 28

Cristallo x : limite de résolution a 0,5 A
Contre 2A pour RMN et 1.22A pour ME
Cristallo X est aussi la plus rapide (heures)

Question 29

Un ptit resume final de la cryo-ME ?

Answer 29

Technique polyvalente, qui permet de visualiser des molécules purifiée et des cristaux et des échantillons cellulaires
Permet de visualiser de gros complexes macromoléculaire en solution avec peu de matériel.