01 Steriles und sicheres Arbeiten

Question 1

Wodurch kann eine potenzielle Biogefährdung in einem (klinischen) Mikrobiologie-Labor entstehen?

Answer 1

• Ursprung des Probenmaterials oft unklar bzw. Probenmaterial mit unbekannten (möglicherweise pathogenen) MOs
• Arbeiten mit hohen Zellkonzentrationen (→ harmlose Keime können dadurch auch gefährlich sein)
• unsauberes Arbeiten
• keine Schutzkleidung
• ungeschultes Personal
• Aerosolbildung (→ häufigste Ursache für Infektionen)

Question 2

Was bzw. welche Maßnahmen gehören zur GMLP?

Answer 2

• Qualität der Kultursammlung aufrechterhalten
• Sterilisation und Desinfektion der Geräte, Equipment, Arbeitsflächen
• Sterilisation und sichere Entsorgung aller Kulturen und Dekontamination/Desinfektion des gesamten verwendeten Equipments
• Persönlicher Schutz (Schutzkleidung, Hygienerichtlinien beachten)
• Alles muss richtig beschriftet werden! (Name, Datum, Organismus, Bedingungen etc.)
• Mit Kontamination und Unfällen richtig umgehen!

Question 3

Was bedeutet es die Qualität der Kultursammlung aufrechtzuerhalten?

Answer 3

• keine Kontaminationen!
• Organismen von autorisierten Sammlungen (z.B. ATCC)
• regelmäßige Vorbereitung frischer “stock cultures” → trotz richtiger Lagerung können viele Zellen sterben und Pilze mutieren oft

Question 4

Warum ist steriles und aseptisches Arbeiten notwendig

Answer 4

• potenziell stellt alles eine Biogefährdung dar
• Schutz von Nährlösungen, Equipment, Geräten und Reinkulturen vor Kontaminationen
• Schutz von Umwelt und Laborpersonal

Question 5

Wie soll das Labor und der Arbeitsplatz konzipiert sein, um steriles Arbeiten zu gewährleisten?

Answer 5

• Fenster und Türen während dem Arbeiten schließen
• Klimaanlagen und Ventilatoren abschalten → Aerosolbildung, Staub wird aufgewirbelt
• Arbeitsraum muss sauber sein!
• Desinfektion der Arbeitsfläche vor und nach jedem Arbeiten
• regelmäßige Reinigung und Desinfektion der Brut-, Tief- und Kühlschränke
• Labor und Arbeitsplatz müssen aufgeräumt sein
• nur tatsächlich benötigte Geräte/Materialien stehen am Arbeitsplatz → gut erreichbar und stören das Arbeiten nicht
• Bewegungsfreiheit

Question 6

Wie muss das Laborpersonal ausgestattet sein und sich verhalten?

Answer 6

• Labormantel: (sauber, lang, hochgeschlossen), mit langen Ärmeln aus schwer entflammbarem, autoklavierbarem Gewebe (Baumwolle)
• abgelegte Kleidungsstücke dürfen nicht in den Arbeitsraum mitgenommen werden (z.B. Jacke)
• lange Haare zusammenbinden
• während des Arbeitens nicht die Haare oder das Gesicht berühren
• Husten und Niesen vermeiden
• bei Erkältung Gesichtsmaske tragen
• kein essen, trinken, schminken im Labor
• keine Aufbewahrung von Lebensmitteln im Labor
• Hände waschen und desinfizieren

Question 7

Wie soll der Umgang mit Geräten und MOs sein?

Answer 7

• zügig aber nicht hastig arbeiten
• immer mit Pipettierhilfen arbeiten
• sterile Gegenstände immer am äußersten Ende anfassen → kein Kontakt mit unsterilen Gegenstände und kein Ablegen
• Kulturgefäße beim Öffnen möglichst weit unten und Deckel möglichst weit oben anfassen → nur so lange wie nötig offen lassen
• Kulturen und kontaminiertes Material/Geräte dürfen nicht mit bloßen Händen berührt werden
• Nicht mehr benötigte Kulturen/Materialien entsprechend (und umgehend) entsorgen
• besondere Vorsicht bei (versporten) Schimmelpilzkulturen -> immer mit Maske und mit Handschuhe (trotz beim Bunsenbrenner, weil Pilze zu gefährlich) arbeiten

Question 8

Welche 2 Geräte verwendet man zum Arbeiten in einer sterilen Umgebung?

Answer 8

Bunsenbrenner, sterile Werkbank

Question 9

Welche Vorteile bietet das Arbeiten mit dem Bunsenbrenner im Vergleich zur sterilen Werkbank?

Answer 9

• kein besonderes Equipment notwendig
• viele Arbeitsplätze gleichzeitig (braucht wenig Platz)
• für sporenbildende Pilze geeignet (mit Pilzen nie in der sterilen Werkbank arbeiten!)

Question 10

Auf welchen 4 Punkten basiert die Sicherheit im Mikrobiologie-Labor?

Answer 10

• Beachtung von Sicherheitsvorschriften - Betriebsanweisung
• Gebrauch von entsprechenden, persönlichen Schutzvorrichtungen (Labormantel, Handschuhe, Brille, Maske)
• richtiges Training
• gutes und effizientes Planen von Experimenten

Question 11

Sicherheitsregeln für Mikrobiologie-Labore

Answer 11

• Zugangsbeschränkung
• Befolge die gute persönliche Hygiene
• Verwende Schutzausrüstung (PPE)
• Impfung
• Sichere Handhabung von Proben
• Dekontamination

Question 12

Wofür steht das BAV und wie definiert es biologische Arbeitsstoffe?

Answer 12

• Biologische Arbeitsstoffe-Verordnung
• Biologische Arbeitsstoffe sind MOs, einschließlich genetisch veränderter MOs, Zellkulturen und Humanendoparasiten, die Infektionen, Allergien oder toxische Wirkungen hervorrufen können

Question 13

Was ist das GVO?

Answer 13

Gentechnik-Gesetz

Question 14

Nenne die biologischen Schutzstufen und was sie ausmachen? → Klassifizierung der Gefährlichkeit von MOs

Answer 14

• Risikogruppe I → BSL1 (Biosafety Labor 1): keine oder nur geringe Gefahr für Beschäftigte und Bevölkerung; Vertreter:
• Bacillus subtillis, E.coli
• die meisten Candida-Arten (Pilz)
• Schimmelpilz der Gattungen Cladosporium und Penicillium
• Risikogruppe II → BSL2: mäßiges Risiko für Beschäftigte und Bevölkerung; Vertreter:
• Staphylococcus aurea, Salmonella spp., Shigella spp.
• Risikogruppe III → BSL3: hohes Risiko für Beschäftigte und geringes für Bevölkerung; Vertreter:
• Gelbfiebervirus
• Yersinia pestis
• Mycobacterium tuberculosis
• Bacillus anthracis (Milzbrandbakterium)
• Risikogruppe IV → BSL4: hohes Risiko für Beschäftigte und Bevölkerung; Vertreter:
• Ebola-, Maul-, Klauenseuche-Virus

Question 15

Maßnahmen in den BSL unterschiedlicher Sicherheitsstufen

Answer 15

• BSL1:
• Beachtung der GMLP und allgemeinen Hygieneregeln
• Personen mit Hautläsionen oder offenen Wunden, werdende oder stillende Mütter dürfen nicht mit Krankheitserregern oder infektiösen Materialien arbeiten
• Bei Hautkontakt sofort desinfizieren (Desinfektionsmittel bei allen Waschbecken)
• Bei Kontamination von Laborflächen: absperren und desinfizieren
• Kulturen und infektiöses Material unter Verschluss halten
• BSL2:
• Warnzeichen “Biogefährdung”
• Schutzkleidung darf nicht außerhalb des Sterilbereichs getragen werden → Schleuse
• kein Schmuck (Uhren, Ringe etc.)
• kräftig gefärbte Schutzhandschuhe aus Latex sind zu tragen
• Aerosolbildung vermeiden oder in der Sterilbank arbeiten
• vorzugsweise Verwendung von Einwegartikeln
• regelmäßige arbeitsmedizinische Vorsorgeuntersuchung
• wenn möglich: Impfung
• Personen mit Hautläsionen oder offenen Wunden, werdende oder stillende Mütter dürfen nicht mit Krankheitserregern oder infektiösen Materialien arbeiten
• Bei Hautkontakt sofort desinfizieren (Desinfektionsmittel bei allen Waschbecken)
• Bei Kontamination von Laborflächen: absperren und desinfizieren
• Kulturen und infektiöses Material unter Verschluss halten

Question 16

BSL3 und BSL4

Answer 16

• Genehmigungspflicht
• umfangreiche Maßnahmen, welche auf den Erreger abgestimmt sind

Question 17

Definition von Desinfektion

Answer 17

• ** Wachstumshemmung **
• ** eliminiert nicht alle lebensfähigen MOs **, sondern verhindert Übertragung von Krankheitserregern [zielt somit direkt auf Pathogene ab (Dekontamination)] und reduziert die Keimzahl
• versetzt totes oder lebendes Material in eine Zustand, dass er nicht mehr infizieren kann
• hemmt/tötet vegetative Krankheitserreger (Endosporen, Pilzsporen) nicht, beschränkt sich nur auf vegetative Krankheitserreger

Question 18

Welche Desinfektionsmittel gibt es?

Answer 18

• Alkohole
• Phenole
• Chloride
• Iod

Question 19

Definition von Sterilisation

Answer 19

• irreversibles Abtöten aller vermehrungsfähiger MOs
• Inaktivierung von Viren
• abgetötete Keime verbleiben im sterilisierten Gut
• Absoluter Begriff (steril/unsteril) im Gegensatz zu Desinfektion

Question 20

“Sterilität ist in der Regel die unbedingte Voraussetzung für mikrobiologisches Arbeiten” ABER?

Answer 20

• in der Praxis selten erreicht
• Kontaminationswahrscheinlichkeit von 10^-6 immer noch vorhanden, ist aber sehr geringfügig

Question 21

Nenne Methoden zur Sterilisation/Desinfektion? Wie werden sie unterteilt?

Answer 21

• auf physikalischer Basis
• Hitze → Heißluft, feuchte Hitze, Pasteurisierung
• Strahlung
• Sterilfiltration
• auf chemischer Basis:
• Antiseptika
• Reinigungsmittel
• Desinfektionsmittel
• Antibiotika, Antimykotika, Virostatika (in vivo)

Question 22

Monitoring von Kontaminationen: Welche Verfahren gibt es zur Erfassung von Keimen

Answer 22

• Abklatsch-
• Abstrich-
• Abschwemmverfahren

Question 23

Monitoring von Kontaminationen: Was wird kontrolliert?

Answer 23

• mikrobiologische Kontrolle aller Oberflächen
• Einsatz in der Lebensmittelindustrie, Ver- und Bearbeitung, Verpackung und Transport
• regelmäßige Kontrolle von Maschinen, Geräte, Finger, Hände, Türklinken etc.

Question 24

Wie funktioniert das Abklatschverfahren

Answer 24

• Platten oder Folien mit einem (Universal-)Medium (z.B. CASO-Agar) werden an das zu untersuchende Gegenstand oder die Oberfläche gedrückt
• (Eigenmarke:) Rodas-Platten = Replicate Organism Detection and Counting
• Abklatschverfahreund dient der Orientierung (Keim vorhanden?), aber keine genaue Differenzierung möglich (welcher Keim?)