Terapia Genética e Celular Flashcards
O que é terapia genica e edição genética? O quais critérios se deve pensar para estratégia molecular e sistemas de delivery/ vias de administração? Quais os efeitos moleculares desejáveis?
Qualquer tipo de processo que envolve a manipulação de genes (DNA) visando tratar uma doença
Manipula diretamente o DNA endógeno da célula e que pode ser usada para fins terapêuticos ou não
Qual gene e qual tipo de alteração promover
Modificação transiente ou permanente/ Tecido alvo
repor a proteína// aumentar efeito ou diminuir efeito dela
Quais as alterações desejadas com a terapia genica e quais as estratégias pra alcança-las? Quais as ferramentas, métodos de entrega e vias de administração que se usam com cada estratégia?
Resgate/ bloqueio/ nova função
Entrega do Gene: entrega produto gênico funcional para célula
RNAi: impede transcrição do gene; bloqueio produto gênico funcional
-Vetor viral-> transdução-> ex vivo ou in vivo
Edicao gene: pode voltar a ter produto gênico funcional ou bloquear
-CRISPR-> DNA (vetor DNA/ viral), RNA (transfecção/ eletropoese) e proteína (t/e)-.> ex vivo/ in vivo
Quais os tipos de vetores virais? Como funciona o sistema CRISPR? Quais as vantagens e desvantagens de cada um desse mecanismos?
Integrativos: retrovirus (apenas em cell divisão) e lentivirus
Não integrativos: adeno vírus/ av associado
-eficiente, estável X eventos de inserção indesejável (mutagenese- câncer)
RNA guia: encontra sequência similar por complementariedade base específica c/ vírus e se ligam a Cas p/ ela destruir o vírus (estrutura complementar- geral)
Cas: endonuclease- enzima que faz quebra de dupla fita
-fácil desenho X efeito off Target (mutagense- câncer)
Como ocorre a edição após o corte de DNA feito pelo CRISPR
Reparo homólogo- necessário fornecer sequência molde (fornecida via vetor viral não integrativo ou trecho curto DNA simples fita) - deve ser homologa nas regiões ant e post local quebra; pode diferir em uma base (correção) ou conter seq a ser add
*apenas cell em divisão, usa cromátide Irma, precisao
Reparo não homologo por junção de extremidades- + frequente; ocorre perda nucleotídeo extremidades
Como funcionam os métodos de entrega e quais tem os efeitos transientes e permanentes?
CRISP- entrega maquinaria edição ex DNA, RNA ou prot
Tranducao- pode entregar maquinaria, sequencia molde ou o gene via vetor viral
Eletroporação: choque termico abre poro cell que entra material exógeno
Transfecção: DNA + agente tf endocitado por cell
Transducao: propriedade viral de injetar mg nas cell
Transiente- vetores não integrativos (perdidos ao longo divisão celular); entrega de mRNA ou proteínas (t/e)
Permanente- vetores integrativos; edição genica
Quais são as células da hierarquia das tronco? Quais as vantagens de se usar a ultima, as células tronco embrionária e a primeira induzida?
Totipotente (originam qualquer tipo cell + tec extra embrionário) -> pluripotente (qualquer tipo cell) -> multi (tipos cell específicos)
Multi: fácil obter, autologas (próprio indv) X não se diferenciam em qualquer tecidos, auto-renovação limitada
CT.E: se diferenciam em qualquer tec, auto-renovação ilimitada X heterologia, potencial tumoral, ética (embrião nao sobrevive)
CTP.I: “ + autologas X difícil produção, potencial tumoral
