Proyecto encode Flashcards
generalidades
- Creado en 2003
- Cataloga elementos funcionales del genoma humano
- Investiga la regulación de la expresión génica y la salud
Objetivo del proyecto ENCODE
Busca identificar regiones:
* Genes codificantes para proteínas y no codificantes
* Elementos reguladores de la transcripción
* Secuencias que median la estructura y dinámica cromosómica
Fase 1 (piloto): 2003-2007
- Evaluar estrategias para identificar regiones del genoma
- Fase de desarrollo tecnológico
- Se eligieron 44 regiones para estudiar (30 Mb, 1% del genoma)
- Identificar regiones de DNA que transcriban RNA
Metodología por hibridación chip-chip
Técnica que permite identificar los sitios de unión de las proteínas que se unen al DNA
- Por medio de la inmunoprecipitacion de cromatina
— Diseño de Ac específicos que se van a unir a la proteína que quiero identificar
Cómo rompemos el DNA?
por sonicazión
pasos
Rompemos el DNA por sonicazion
hibridas DNA
Aíslas solo los fragmentos que contienen la secuencia complementaria que buscas.
Le pones el Ac.
Lo purificas para quitarle el Ac y la proteína
En qué consistía la fase 2: 2008-2012 (publicada en 2019 en Nature)
Caracterización de RNAs no codificantes
Qué porcentaje del genoma tiene regiones de DNA con union a proteínas?
8.1%
Qué es el factorbook?
base de datos de sitios de unión a factores de transcripción
Qué hacían los sitios de unión a factores de transcripción?
ayudan a explorar propiedades de la cromatina
Evalúan unión de H3K27me3
modifican epigenetica de histona H3
trimetilacion de lisina 27
dónde hay interacción entre histonas y promotores?
donde debe haber regiones que se hipo o hipermetilen para su transcripción
Qué le pasa a las histonas metiladas?
son silenciadas
Para qué sirve la técnica Cage-seq?
para identificar sitios de inicio de transcripción (TSSs)
En esas regiones se identificaba CAP para saber si era un transcrito
Cuántos nt tienen los RNAs que no se traducen a proteínas?
menos de 200nt
qué hacemos para conocer la secuencia de RNAm que no codifican proteínas?
Identificar TSSs