methode exploration de la cellule Flashcards
def electrophorese
séparation des molécules selon leurs poids moléculaires
def culture cellulaire
culture de cellules vivantes in vitro
avec des éléments nutritifs ( eau acide aminée glucose …)
à 37C°
+ supplément sérum de veau fœtal
ajout de substance nutritive
insuline + transferrine + Albumine
facteur de croissance: EGF NGF IL-2
EGF : endothelial grown factor
NGF: neuronal grown factor
IL-2 interleukine 2
ajout d’un indicateur coloré : le rouge phénol
condition : 37C° avec un CO2 de 5%
principe du sérum de veau fœtal
ajouter en supplément pour la division lors de la culture cellulaire
la couleur du rouge phénol peut varier selon le pH comment ?
orange si PH < 7
route si PH =7,2-7,4
violet si PH = 7,8
quelles sont médicale peut-on obtenir après une culture cellulaire ?
FIV
vaccin
thérapie cellulaire production de molécule
lors de la culture cellulaire que se passe t’il en culture primaire
la sénescence = dégradation plus rapide et ralentissement des divisions
étapes de l’isolement des cellules à partir d’un tissus
1) dissociation mécanique
2) dissociation enzymatique par des protéines
3) identifier et enrichir
c’est quoi la dissociation mencanique
c’est des prélèvement on prélève des tissus d’où le nom mécanique
c’est quoi la dissociation enzymatique
pour obtenir des cellules isolée :
cellule de la matrice extra cellulaire : avec l’enzyme trypsine qui digère al matrice
cellule de jonctions : avec EDTA agent chelateurs de Ca**
quel est le but d’identifier et enrichir ( 2 méthodes) ?
différences de propriété physique :
taille adhérence densité
ou en utilisant des anticorps qui vont reconnaître des antigènes spécifiques
deux méthodes pour utiliser des anticorps spécifique pour reconnaître un antigène
soit couplé à un support
soit couplé à un colorant fluorescent
principe de la cytometrie en flux =FACS
mesure des propriétés optiques de cellule transporté par un liquide vecteur : FLUX
ça veut dire quoi LASER
light amplification by stimulated émission or radiation
que permet la technique de cytometrie en flux ? et quels sont les avantages
d’analyser les cellules individuellements de façon automatique .
avantages :
-rapides
-applicable aux cellules vivantes
-haut débit
-marquage multiple ce qui permet d’obtenir des populations très spécifiques
- cellules vivantes peuvent être remise en culture ( si couplé à un trieur de cellule )
mesure vision œil nu MO ME
œil nu 0,2 mm 200 micron
MO 0,2 micron 200 nanomètre
ME 0,2 nanomètre si coupe biologique 2 nm
quelles est la différences de résolution entre ME et MO
facteur 100
méthode MO (3)
epiflurescence
confocale
lumière blanche
MO c’est que des cellules mortes ?
oui le microscope optique observe que des cellules mortes
grossissement du MET et du MEB
MET 1500 a 500 000x
MEB 20 a 400 000x
résolution du MET et du MEB
MET —> 2nm
MEB—> 10nm
fonctionnement du MET
passage d’un faisceau d’électron à travers une coupe ultra fine
le faisceau est agrandit par les électroaimants et vient former une image sur un écran fluorescent
fonctionnement du MEB
technique privilégié pour observer des surfaces relief et forme
obtention d’une image 3D
⚠️PAS DE COUPE
préparations échantillons :
-déshydratation ( à l’acétone par exemple )
donc ex fixation au glyceraldehyde et déshydratation à l’acétone
- dépôt d’or ou de platine
les électrons sont réfléchis sur l’objets et repris par un détecteur
quelles méthode on utilise pour étudier l’ADN l’ARN et les protéines
southern blot : ADN (suD)
northerblot: ARN (noRd)
western blot : protéine western= Pistolet
grâce à quelle méthode on réalise une exploration moléculaire
grâce au fractionnement subcellualaite
but de fractionnement subcelluaire et étapes
but : séparer , isoler , purifier les organites et macromolécules
étape:
1) homogénéisation
2) centrifugation ultracentrifugation
qu’est ce qu’on obtient à une centrifugation de 1000g 10 min
noyaux et débris cellulaire
qu’est ce qu’on obtient à une cebtrifugation de 20 000g 20 min
mitochondries
lysosomes
peroxysomes
que est ce qu’on obtient lors d’une centrifugation de 80000g 60 min
mircrosomes
RE fragmenté
qu’est ce qu’on obtient lors d’une ultarcentrifugation de 150 000 durant 3h
ribosomes
virus
macromolécules
cytosol
quelle sont les méthodes pour analyser l’ADN (4etapes)
1) electrophorèse (séparation selon le poids moléculaire )
2) transfert
3) hybridation
4) révélation
chromatographie
electrophorese
séquençage des protéines
grâce à quoi a lieu l’hybridation quand on veut étudier l’ADN dans le cas de western Blot ?
grâce a des anticorps alors que de base on utilise des sondes spécifique !
