Labbhandledning 2

Question 1

Hur ska du arbeta under cellodling?

Answer 1

Sterilt arbete

Question 2

Vad för typ av bänk skall du arbeta på vid cellodling?

Answer 2

LAF-bänk utrustad med HEPA-filter som förhindrar infektioner

Question 3

Har man undertryck eller övertryck i utrymmen där man odlar celler? Varför/varför inte har man övertryck/undertryck?

Answer 3

Man har ett övertryck av luft så att luften kan strömma ut från cellodlingsområdet, när man öppnar dörrar till andra utrymmen. Ett undertryck i sin tur skulle öka risken för kontamination och infektion.

Question 4

Vad innehåller cellodlingsmediet?

Answer 4

Aminosyror, vitaminer, näringsämnen,organiska salter. För att ha koll på pH finns fenolrött med som är en pH-indikator.

Question 5

Varför infekteras lätt celler i odling? Vad kan du göra för att minska risken för infektion?

Answer 5

De saknar försvarsmekanismer. Jag kan tillsätta antibiotika.

Question 6

Vanligaste kontaminationerna utgörs av? Och varför?

Answer 6

Svamp, jästsvamp, mykoplasma, bakterier. Dessa överförs ofta ofrivilligt från slemhinnor och hud, där de utgör en del av normalfloran.

Question 7

Funkar antibiotika på svamp?

Answer 7

Ja men svamp är resistent mot den flesta antibiotikan.

Question 8

Vilken mikroorganism kan föröka sig i cellfri miljö?

Answer 8

Mykoplasma

Question 9

Hur kan du konstatera en kontamination?

Answer 9

Färgomslag, grumlighet eller flockig växt i mediet.

Question 10

Vad ska du göra om du upptäcker kontamination?

Answer 10

Jag skall avlägsna de infekterade cellerna direkt på grund av att kontaminering sprids mycket fort. En kontamination kan snabbt, de kan snabbt infektera ett helt cellodlingslabb.

Question 11

Kan värdefulla cellkulturerer med bakterieinfektioner behandlas?

Answer 11

Ja de kan dem men de bör helst undvikas.

Question 12

Hur ofta skall cellerna kontrolleras och vad tittar du på?

Answer 12

Man gör kontroller löpande. Man gör en visuell bedömning av cellernas tillstånd; morfologi, kontaminering, cellmediets näringsinnehåll (bedöms på färg). Den visuella bedömningen görs i mikroskop och där ska man titta på levande och döda celler samt konfluens

Question 13

Vad menas med konfluens?

Answer 13

Hur stor del av plattan som är täckt av celler

Question 14

Vad säkerställer en nedfrysning av celler?

Answer 14

De skapar ett skydd mot infektion samt säkerställer den specifika celllinjens fysiologiska egenskaper.

Question 15

Vad skall du tillsätta strax före nedfrysning och varför gör du detta?

Answer 15

Kryoskyddande ämne förhindrar att cellerna förstörs under nedfrysningsprocess. Ett vanligt ämne är DMSO.

Question 16

Hur skall en nedfrysning gå till?

Answer 16

LÅNGSAMT. 1-3 grader per minut till ungefär -70 grader. Därefter kan en snabbare sänkning ske.

Question 17

Varför är de viktigt med långsam nedfrysning?

Answer 17

Detta är viktigt för att cellerna skall hinna avge tillräckligt mycket vatten till den extracellulära vätskan genom osmos vilket förhindrar isbildning intracellulärt.

Question 18

Ska upptining gå långsamt eller snabbt?

Answer 18

Snabbt! Direkt från fryst till 37 grader sedan vidare till odlingsskål med medium.

Question 19

Vad kan hända om din upptining tar för lång tid?

Answer 19

Det kryoskyddande ämnet kan vid längre tids exponering eller i för hög koncentration vara toxiskt för cellerna. En snabb hantering skyddar därför cellernas utsatthet genom att minimerar tiden i det kryoskyddande ämnet, samt ger en snabb tillgång till den viktiga näring som finns i mediet och som behövs för viabiliteten. Finns serum i mediet (KOMPLETT MEDIUM) , så neutraliseras den toxiska effekten av DMSO.

Question 20

Vad kan hända om cellerna växer för tätt eller för glest?

Answer 20

Om cellerna växer för tätt, uppstår KONFLUENS. Detta kan hämma tillväxten. Vid motsatta förhållanden, när cellerna växer för glest och inte får tillgång till närliggande cellers proteinsekretion. Även då kan tillväxten försämras.

Question 21

Varför ska du alltid lägga på locket vid cellodling mellan moment?

Answer 21

Cellerna kan torka och de kan även ske kontamination.