Cellodling Flashcards
Vad finns de för användningsområden vad gäller cellodling?
- Forskning
- Diagnostik
- Behandling
- In vitro fertilisering
- Läkemedelindustri
- Tillverkning av monoklona antikroppar
Vad gäller riskbedömning och riskfaktorer, vad säger den svenska lagstiftningen ?
Arbetsgivarens skyldighet att så långt så långt som möjligt skaffa
sig kunskaper om vilka biologiska ämnen som förekommer på
arbetsplatsen, göra riskbedömningar av dem och klassificera dem ..”
Säkerhet och riskbedömning vid cellodling (för laboranten) vad skall du tänka på?
Humana Odlade celler, - Virus •hepatit B •HIV •Vectorer - Tumör celler - Cellgifter (Cytostatika) - Tillväxtfaktorer - Isotoper - Prioner - Trypanblått
Beskriv arbetsutförandet vid cellodling
Använd skyddskläder, handskar och rena skor
- Arbete med celler, homogenisering, spädning och tömning av rör ska utföras i LAF-
bänk
- LAF-bänken ska rengöras/desinfekteras både före och vid arbetets slut
- Undvika att ha onödiga saker i LAF-bänken
- Använd alltid engångs bruka pipettspetsar
- Allt ätande, drickande och användande av kosmetiska är förbjuden
Hur går Avfallshantering till vid cellodling?
Samlas upp i speciella täta behållare, autoklaveras och transporteras för destruktion
Skärande, stickande avfall ska samlas i speciella behållare för autoklavering och
desinfektion innan bortskaffande eller åter användning
Vad skall de finnas för instrument i en cellodlingslokal?
- Laminar Air Flow (LAF-bänk)
- Inkubator: CO2, temperatur och luftfuktighet
- Centrifug och pipetter
- Invertemikroskop
Beskriv en CO2 inkubator med tanke på temp, luftfuktighet och pH
CO2-inkubator:
- Temperatur 37°C (trivs bäst)
- Luftfuktighet 95-98% (ej torka ut)
- CO2, pH 7.2-7.5 (kunna upprätthålla buffert system)
Hur förvaras cellerna
Kort förvaring -80 till -130°C
Lång förvaring flytande kväve -196°C
Frystorkat tillstånd
Säkerhet och riskbedömning vid cellodling (för celler), vad skall du tänka på?
- Bakterier
- Mykoplasma
- Virus
- Svamp
- Prioner
Vad är symptomen på kontamination?
- Färgomslag
- Tillväxthastighet
- Morfologi
- Cellprodukter
- Celldöd
Vad ska ett basalt odlingsmedel innehålla?
- Aminosyror (Arg, Cys, Glu, His och Tyr+ ESS. AA)
- Vitaminer
- Glukos
- Salter
- pH, 7.2-7-5 + pH indikator
- Buffert system (koldioxid/bikarbonat)
- Osmolaritet (ca 290 osmo/l)
Vad finns de för komplementmedium
- Basal medium
- Antibiotika (PEST)
- Fetal kalv serum (FCS)
- Tillväxtfaktorer
- Insulin
Vad har vi för cellkulturer och vad ingår i dem?
- Adherenta celler
- Epitel celler, bindväv celler, muskelceller, fibroblaster
- Suspensionskulturer
- Vävnadsvätskor
Odling av adherenta celler, hur går de till?
- Primär kultur (passage 1): vävnadsodling; hud, muskel, nervvävnad…..
- Cellinje: celler från primär kultur, passage 2, har överförts till ny odlings behållare
- Etablerad cellinje: kan genomgå oändliga passager (Immortaliserad)
Cellulär adhesion
Celladhesion gör att celler kan binda till varandra och känna av sin omgivning. Detta sker genom så kallade adhesionsreceptorer.
Man pratar två olika principiella typer av celladhesion:
- Cell-celladhesion, som förbinder celler med varandra
- Cell-matrixadhesion, som förbinder celler till extracellulärt matrix i exempelvis basalmembran eller kollagen i bindväv
Detta är en viktig funktion för att reglera vävnadstillväxt. Celler ska exempelvis bara dela sig när de sitter fast på en yta (för att inte ge upphov till tumörer), dessutom ska de bara dela sig vid tillväxt eller för att reparera skador. Detta känner cellerna av bland annat genom celladhesionsproteiner av olika slag. (Då exempelvis ett sår uppstår kommer celler i huden att känna av att det saknas celler bredvid dem, och därför börja dela sig för att fylla igen hålet. När hålet är igenfyllt så känner cellerna istället av att det “har blivit trång”, och slutar då att dela sig eftersom skadan är läkt. )
Vid flera typer av cancer fungerar inte denna signalering som den ska, utan celler kan dela sig fast de inte sitter fast emot ett basalmembran, och fastän de inte behöver dela sig för att fylla igen skador.
