Gammal tenta 2 Flashcards
Vilket fixeringsmedel är de vanligaste man använder vi kemisk fixering av vävnader som skall paraffinbäddas?
Formalaldehyd
Vilken koncentration har oftast formalaldehyd fixering?
4%
Vilken volym skall formalaldehyd ha i relation till den volymen av den vävnad som skall fixeras?
10-20 ggr större
Finns de några hälsorisker med formalaldehyd?
Ja, det är cancerogent. Undivik hudkontakt och inandning
Man dela in fixeringsmedel i denaturerande och gelerande fixmedel. Vad innebär denaturerande?
De denaturerande fixeringsmedelen bryter upp tetriärstrukturern och denaturerar proteinerna dvs förändrar deras form. De gör att både hydrofil och hydrofob grupp exponeras. De är en irreversibel reaktion.
Vad innebär ett gelerande fixmedel?
Detta innebär att tetriärstrukturen bibehålls och endast hydrofil grupp exponeras samtidigt som proteinstrukturen bevaras. Denna fixeringsmetod bevarar således vävnadstrukturen bättre än de denaturerande. Problemet kan dock vara att de gömmer epitoper vid immunohistokemi. Det skapas vid användandet av generande fixmedel en viss reversibel reaktion
Varför är det viktigt att alla nytagna prover fixeras så snabbt som möjligt?
För att förhindra att vävnaden bryts ned. Börjar den brytas ned kommer vi inte så något i mikroskopet. Fixeringen förhindrar autolys, att bakterier kan fästa på vävnaden samt gör cellulära substanser olösliga.
Hur gör du när du immersionsfixerar en vävnadsbit?
Jag avlägsnar vävnadsbiten från individen och lägger ner den i exempelvis formalin.
Hur perfusionsfixerar du?
Injicerar fixeringsmedel i kärlen så att de snabbt sprider sif ut i kroppens alla vävnader och på så sätt får jag en bättre fixering än vad jag får vid immersionsfixering. Detta görs vid djurförsök och alltså inte på människor eftersom man dör.
Hur binder en polyklonal antikropp i jämförelse med en monoklonala antikropp till ett antigens epitoper?
Polyklonala antikroppar är en heterogen samling av antikroppar och kan binda till flera olika epitoper medans de monoklonala härstammar från en och samma cell-linje och på så sätt är identiska och binder en specifik epitop-
Vid immunohistokemisk visualisering av vissa antigena epitoper har man i metoden behövt använda sig av ett antigen retrieval buffert. Vad gör antigen retrieval buffer?
De bryter upp metyelnbryggorna som skapats av de gelerande fixeringsmedlet och frilägger de gömda epitoperna
I språkbruket inom immunohistokemi använder man sig av förkortningar ibland. Vad står förkortningen LSAB-peroxidas för?
Labelled streptavidin biotin - peroxidas
Redogör för metod och steg vid LSAB-peroxidas metoden
Primär antikropp som är anti-human används ex mus, denna fästs vid epitoperna på antigenet.
Sekundär antikropp som är biotin konjugerad binder sedan till primär antikropp genom att denna är anti-mus.
Tillsätter sedan streptavidin som är Peroxidaskonjugerad.
Tillsätter sedan kromogen-substratlösning t.ex. DAB som reagerar med Peroxidaset och vi får en inflygning.
Primärantikropp (mus)- sekundär biotinkonjugerad antikropp (anti-mus)-streptavidin peroxidaskonjugerad-kromogensubstratlösning; reaktion peoxidas och kromogensubstrat -> färg.
Man tillverkar alltså en antikropps kedja som avslutas med ett enzymkomplex.
Du har gjort en indirekt visualisering med immunologisk inmärkning. Du har haft positiv, negativ kontroll samt patientprov. Alla proven har färgats.
A: Sann positiv inmärkning på ditt provglas?
B: motivera ditt svar
A: nej
B: Eftersom min negativa kontroll också har färgats kan jag inte lita på mitt svar. De kan nämligen vara så att jag glömt tillsätta väteperoxid som blockerar endogent Peroxidase eller att min antikropp bundit in till flera epitoper vilket ska blockeras med serum vilket jag också kan ha glömt. Jag får alltså inget trovärdigt resultat
Varför grovsnittar man?
För att jag ska komma ner i vävnadsbiten ordentligt så att läkaren kan få allt material att titta på.
Varför finsnittar du?
Pga att jag ska få ett tunt fint snitt, som blir fint vid visualisering. Ett för tjockt snitt kan göra att detaljer inte syns lika fint.
